鞘内注射甲氨蝶呤对胫骨癌痛大鼠机械痛敏的影响及其脊髓机制的研究

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1、徐州医学院硕士学位论文鞘内注射甲氨蝶呤对胫骨癌痛大鼠机械痛敏的影响及其脊髓机制的研究姓名：岳冬梅申请学位级别：硕士专业：麻醉学指导教师：申文2012-04徐州医学院硕士学位论文鞘内注射甲氨蝶呤对胫骨癌痛大鼠机械痛敏的影响及其脊髓机制的研究中文摘要目的观察鞘内注射甲氨蝶呤对胫骨癌痛大鼠机械痛敏的影响，并观察其_jc}寸脊髓小胶质细胞的活化以及促炎性细胞因子肿瘤坏死因子一Cc(TNF一0【)和白细胞介素一1D(IL一1p)分泌的影响，初步探讨其可能的脊髓机制。方法实验分两部分完成，第一部分实验：将48只雌性SD

2、大鼠随机均分为6组(n=8)：假手术+AmN脊液组(SA组)，假手术+甲氨蝶呤20099组(sM组》，骨癌痛+人工脑脊液组(CA组)，骨癌痛十甲氨蝶呤5099组(CM50组)，骨癌痛+甲氨蝶呤10099组(CMl00组)，骨癌痛+甲氨蝶呤20099组(CM200组)。模型组胫骨骨髓腔内注射Walker256乳腺癌细胞，假手术组胫骨骨髓腔内注射等体积生理盐水，各组于造模前，造模后1、3、5、7d测定机械性缩足阈值(MWT)，第7天测定MWT后鞘内注射相应剂量甲氨蝶呤或等体积人工脑脊液，并于给药后2l、4、8、

3、24h与给药后2、3、5、7d测定MWT，最后处死大鼠留取手术侧胫骨，}HE染色观察胫骨内肿瘤细胞生长情况。第_-2部分实验：将30只雌性sD大鼠随机均分为3组(n=lO)：假手术+人工脑脊液组(SA。l组)，骨癌痛+人工脑脊液组(CA。组)，骨癌痛+甲氨蝶呤10099组(CM，。组)。各组于造模前，造模后1、3I5、7d测定机械性缩足阂值(MWT)，第7天测定MWT后鞘内注射甲氨蝶呤1009ll或等体积人工脑脊液，并于给药后2、4、8、24h测定MWT；随后分别行灌注取材和新鲜取材，免疫荧光观察脊髓小胶质

4、细胞的活化情况，Elisa检测脊髓TNF—a【和IL一1B含量的变化。2徐州医学院硕士学位论文结果(1)机械痛行为学：胫骨骨髓腔内注射同源乳腺癌细胞后大鼠MWT逐渐降低，至造模后7d时较术前明显减低(P<0．05)；鞘内注射甲氨蝶呤后MWT逐渐增加，其中CMl00组与CM200组在给药后4h较给药前增加(-P<0．05)，至24h时达最大效应(氏0．05)，持续至给药后5d时恢复到给药前水平(扮0．05)，但仍高于CA组(尺0．05)。(2)胫骨组织学：CA组与CM200组组织学检测发现胫骨髓腔内充满了肿瘤

5、细胞，骨结构改变明显，而SA组未见骨结构改变。(3)免疫荧光染色：CA。。组Iba一1染色的小胶质细胞几乎遍布整个脊髓背角灰质，胞体肥大，染色加深，小胶质细胞计数显示CA。组较SA，，组明显增加(氏0．05)，而鞘内注射甲氨蝶呤后CM，。组脊髓背角小胶质细胞计数较CA。。组明显减少(P<0．05)。(4)Elisa：脊髓TNF一0【和IL一1p的表达量在CAlI组显著增高(与SAlI组比较，氏0．05)；而CMlI组与CAlI组比较则显著降低(尸<0．05)。结论鞘内注射甲氨蝶呤可以减轻胫骨癌痛大鼠的机械痛

6、敏，其脊髓机制可能与抑制脊髓小胶质细胞的激活及促炎性细胞因子TNF—a和IL一16的分泌有关。关键词骨肿瘤；疼痛；甲氨蝶呤；小胶质细胞；肿瘤坏死因子．d；白细胞介素一lB徐州医学院硕士学位论文Effectofintrathecalinjectionofmethotrexateonmechanicalallodyniaandthespinalmechanisminaratmodelbonecancerpainoftibia_lAbstractObjectiveToobservetheeffectofintra

7、thecalinjectionofmethotrexateonmechanJcalallodyniainaratmodeloftibialbonecancerpain，andinvestigateifmethotrexateJ：aninhibittheactivationofmicrogliaandthesecretionofTNF一0【andIL一113inthespihalcord．MethodsPartITotalof48femaleSprague—Dawleyratswererandomlydivi

8、dedint占6groups(n28each)：shamoperation+artificialcerebrospinalfluid(groupSA)．shhmoperation+methotrexate200pg(groupSM)，bonecancerpain+artificialcerebrospinalfluid(groupCA)，bonecancerpain+methotrexate50pg(groupC