板栗花黄酮的提取、纯化及其生物学功能研究

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1、分类号：学校代码：10069密级:学号：201320040硕士专业学位论文板栗花黄酮的提取、纯化及其生物学功能研究StudiesontheExtractingandPurifyingTechnologyandBio-fimctioiisoftheTotalFlavonoidsfromChestnutFlower专业轻工技术与工程研究牛李月娇指导教师王雪青独创性声明及使用授权声明一、学位论文独创性声明本人所撰写的学位论文是在指导教师的指导下独立完成的研究成果。除己明确标注或得到许可外，所撰写的学位论文中不包含他人己申请学位或其他用途所使用过的成果，不包含其他个人

2、或集体已经发表或撰写过的研究成果，本人的指导教师对此进行了审定。对本文的研究做出重要贡献的个人或集体，本人已在文中做出明确的说明并表不谢意。如有不实，本人承担相应责任。本人同意授权天津商业大学以非赢利方式保存、使用本人的学位论文的电子版及纸质版。授权天津商业大学将本论文的全部内容或部分内容提供给有关方面编入数据库进行检索、出版及提供信息服务。同意学校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。本人在校期间取得的研究数据、相关成果等知识产权归天津商业大学所有。注：涉及保密的学位论文在解密后适用本授权。分类号：学校代码：10069密级：研究生学号：20132004

3、0板栗花黄酮的提取、纯化及其生物学功能研究StudiesontheExtractingandPurifyingTechnologyandBio-functionsoftheTotalFlavonoidsfromChestnutFlower研究生姓名：李月娇专业名称：轻工技术与工程指导教师姓名：王雪青教授论文提交日期：2015年5月学位授予单位：天津商业大学摘要板栗在我国一直被广泛种植，其中的附属产物板栗花一直被作为废弃物丢弃，未得到合理的加工利用。板栗花中所含营养成分丰富，其中黄酮类化合物含量较高，具有一系列对人体健康有益的生理药理活性，极具开发潜能。因此，开

4、展板栗花资源的综合开发利用，不仅会减轻对环境的污染，而且会为栗农带来可观的经济效益，具有十分重要的意义。本研究以板栗花为原材料，首先采用不同方法对板栗花中的黄酮类化合物进行提取，并对提取工艺进行优化；其次采用大孔树脂将黄酮粗提物进行纯化，然后利用HPLC对纯化后的板栗花黄酮进行成分分析，测定板栗花黄酮中的槲皮素，山柰酚的含量；最后分别对板栗花黄酮进行抑菌、抗氧化、细胞活性影响实验，评价其抑菌活性、抗氧化能力及细胞毒活性，为板栗花的综合开发与利用提供实验依据。1.采用乙醇回流提取（Alcohol-refluxextraction，ARE）、半仿生提取（Semi-

5、bionicextraction，SBE）两种工艺分别对板栗花中的黄酮类化合物进行提取，通过单因素实验研究提取时间、提取温度、料液比、乙醇浓度等工艺参数对提取率的影响；通过正交试验优化提取工艺，得到以下板栗花黄酮的最佳提取工艺参数，ARE法：乙醇浓度80%、提取时间2h、料液比为130∶，黄酮得率为6.62%±0.07%；SBE法：提取温度80℃、提取时间10min，料液比为1∶20，黄酮的得率为6.76%±0.11%。2.利用大孔树脂对板栗花黄酮粗提液进行分离纯化研究。首先对型号为AB-8、D101、X-5、D3520的四种大孔树脂进行吸附率和解析率的测定，

6、选取纯化效果较好的大孔树脂；然后通过单因素试验考察样液浓度（mg/mL）、样液pH、洗脱液浓度(mg/mL)对吸附效率的影响，探究板栗花黄酮的分离纯化工艺；采用HPLC对通过水提（Water-refluxextraction，WRE）、ARE、SBE三种工艺提取的板栗花黄酮进行成分分析，测定其中槲皮素和山柰酚的含量。结果表明：型号为AB-8的大孔树脂纯化效率较高；上述因素均会影响纯化效率，随各因素数值增加，纯化效率均先升高后降低；经纯化后的板栗花黄酮中槲皮素含量分别为：ARE法：2.28%；WRE法：2.01%；SBE法：2.22%，山柰酚含量分别为：ARE法

7、：0.96%；WRE法：1.0%；SBE法：0.98%。3.以抑菌圈及最小抑制浓度(MIC)为指标评价板栗花中黄酮类化合物的抑菌效果。结果表明：板栗花黄酮具有良好的抑菌效果，对供试菌株的敏感性从大到小依次为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、大肠杆菌(E.coli)和啤酒酵母菌(Saccharomycescerevisiae)；且采用SBE工艺制备的黄酮的抑菌效果优于ARE与WRE的。因此SBE是一个很有潜力的提取板栗花黄酮的方法。4.通过测定板栗花黄酮对羟基自由基(·OH)、超氧阴离子(O2-·)的清除率及总还原力，研究其体外抗氧化性能。结果表

8、明：板栗花黄酮具有较强的还原力并能有效