猪源杀菌通透性增加蛋白n端基因的克隆原核表达及抗菌活性测定

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1、一．飞苗，＇紫，－，．．．—．．．．．．＊＊＇、，．；．一．－Ｖ＼Ｖ．’＇：Ｓ２０１３６３０１分类号；Ｓ８巧饼Ｏ．ｔ．学号‘一，产．．．。＞－．？，、．一、？？—一．吉占，＇■、？四川农业大学？？．？＊＞Ａ心．％，、？？．Ｖ：＂专业硕七学位论义＾令、、？、＇．、猪源杀菌通透性增加蛋白Ｎ端基因的克隆原核表达及抗菌活性测定－一陈平ｇ，、＾‘－指导教师玉印數援／Ｓ＾巧＼、．Ａ

2、岳建国研究员校外导师－，，，？＊Ｖ？．．一、＇■＾妻Ｖ、三Ａ－学位类别兽戾硕壬卷、、、？．领域名称预防兽医学，Ｋ、？、ａ＾Ａ，：？二户交’—＇；＇＊？＇，微生物与免疫学？研究方时：＾‘？Ｃ，－－．ｊ．弟？ｆ，．或＇、成作；？．％讓巧２０１５年６月．＇＇－：、人＼＼乂ｒ＂．、－、偶’．５产■黎．，：成：尸．飞．．ｉ＼＇．．■乂．．＇＇＇－护，－Ｖ‘＼，／‘．Ｃｌａｓｓｉｆｉｅｄ

3、ｃｏｄｅ：Ｓｉｃｈｕａ打Ａ＾ｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮＳｕｂｍｉｔｅｄｉｎＰａｒｔｉａｌＦｕｌ拉ｌｌｍｅｎｔｏｆｔｈｅＲｅｕｉｒｅｍｅｎｔｆｏｒｑＭＡＳＴＥＲＤＥＧＲＥＥＡｏｒｃｉｎｅｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌｅｒｍｅａＭｉｔｉｎｃｒｅａｓｅｐｐｙ－ｒｏｅｉｎＮｔｅｒｍｉｎａｌｅｎｅｃｌｏｎｉｎａｎｄｐｆｇｇｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙＣｈｅｎＰｉｎｇＤｉｒｅｃｔｅｄ

4、ｂｙＰｒｏｆ．ＷａｎＹｉｎｇ’Ｙａａｎ，ＳｉｃｈｕａｎＣｈｉｎａＪｕｎｅ２０１５论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取。尽我所知，除了文中特别加Ｗ巧注和致谢的地方外得的成果，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料一同工作的同志对本研巧所。与我做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名；巧、的＾年月八曰卡关于论文使用授巧的声明本人完全了解四川农业

5、大学有关保留、使用学位论文的规定，目Ｐ：学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借Ｌ飼，可乂采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农化大学可（＾用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。。□於ｉ论文不保密本论文保密，在密后适用本授权。＿＿年解＂＂（请在Ｗ上□内划Ｖ）＇＜研巧生签名：如５年月八日＾＾导师签名：０＾（月＾＾日中文摘要随着当代社会出现了大量抗生素的滥用，药物残留现象已经变得越来越严一重一。杀菌通透性增加蛋白（ＢＰＩ）Ｗ

6、其作为种具有天然的防御功能的种新型物质出现。其特点是具有广谱的抗菌、抗肿瘤、抗寄生虫等方面的生物学特性。并且具有细菌不容易产生耐药性的特点而被人们寄希望于在未来能够取代抗生一素，作为种新型药物出现。猪源杀菌通透性增加蛋白一（ＢＰＩ）作为种来自于猪中性粒细胞中分离得到一起主要杀菌作用的为猪源杀菌通透性増加蛋白的种抗菌活性物质。其中（ＢＰＩ），一Ｎ端基因￣２４０个氨基酸组－，般由２００成。大多数的革兰阴性菌对ＢＰＩＮ端蛋一－白非常的敏感，Ｎ蛋白对少部分的革兰阳性菌也具有并且，ＢＰＩ定的抗菌活性。本实验通过利用基因工程技术

7、对ＢＰＩ－Ｎ端基因进行克隆表达Ｗ及抗菌活性的研巧一。为Ｗ后猪源杀菌通透性増加（ＢＰＩ）Ｎ端蛋白的实际生产Ｗ及应用提供定理论基础。１ＰＩ－Ｎ、Ｂ端基因的扩增根据ＮＣＢＩ上已发表的猪源杀菌通透性增加蛋白（ＢＰＩ）基因序列，利用软。ｓａ件，分析得出了猪源杀困通透性增加蛋白化ＰＩ）Ｎ端基因序列再利用ＤＮＡｔｒ、Ｐｒｉｍｅｒ５化及Ｏｌｉｇｏ等软件，设计了两条猪源杀菌通透性增加蛋白（ＢＰＩ）Ｎ端基因的扩增引物Ｐ１、Ｐ２，并加入肠激酶切割位点，为后期肠激酶作用提供鞭向引导，Ｗ防表达产物被组氨酸标签包裹而不具有抗菌活性。从猪的

8、肝脏中抽提１－ＲＮＡ。９Ｔ。，进行扩增将其插入ＰＭＤ载体上进行测序所获序列与已发表的猪源杀菌通透性增加蛋白（ＢＰＤ