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《试析运动发酵单胞菌和大肠杆菌间穿梭质粒载体的构建》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、天津大学硕士学位论文运动发酵单胞菌和大肠杆菌间穿梭质粒载体的构建姓名：高卫华申请学位级别：硕士专业：化学工艺指导教师：张敏华20040701中文摘要运动发酵单胞菌属于革兰氏阴性细菌，微好氧生长。由于其对糖的摄取速度和发酵产醇速度均优于传统酿酒酵母，被人们认为是极具开发潜力的乙醇生产菌。但其可利用的碳源仅为葡萄糖、果糖和蔗糖。为此人们在利用基因工程手段将外源基因导入该菌种，进而拓宽其可利用碳源的范围等方面做了大量的工作。本文介绍了一种Zmobilis-E.coli之间的克隆型穿梭质粒的构建。将由ZmobilisATCC10988中分离出的2.7kb质粒pZM2，插入大肠杆菌载体质
2、粒pBR328的Sphl酶切位点，构建成大小约为7.6kb的重组穿梭质粒(pZBt)。该质粒具有却r和Cm,两个抗性标记，在其氨节青霉素抗性基因上有Ahdl,Pstl,Pvul插入位点，在氯霉素抗性基因上有Psp,EcoRl,Neol插入位点。该质粒能够成功转化EcoliDH5。和ZmobilisCP4菌株。同时，对该质粒在E.coliDH5。和ZmobilisCP4中的稳定性进行了考察。另外，对ZmobilisATCC10988和CP4在不同培养基中的生长情况进行了考察，结果表明T培养基更适于试验菌株的生长。同时，考察了SDS-碱裂解法和Nester法两种质粒提取方法，并对p
3、ZM2进行了限制内切酶分析鉴定。关键词:乙醇运动发酵单胞菌穿梭质粒ABSTRACTZymomonasmobilisisafacultativeanaerobicgram-negativebacterium.BecausetherateofsugarupdateandethanolproductionisbetterthanthatofSaccharomycescerevisae,为,momonasmobilisisconsideredtobeastrainofpotentialdevelopmentinethanolmanufacture.Howeverthefermentat
4、ionmaterialusedbyZymomonasmobilisislimitedtoglucose,fructoseandsucrose.Toexpandthefermentationrawmaterialrange,efforthasbeenmadetointroduceheterologousgenesrelatedtoxylosemetabolismintoZymomonasmobilisbygeneticmanipulation.Inthispaper,anewshutlevectorbe吸weenZmobilis-E.cohisconstructedbyinser
5、tingthe2.7-kilobasepair(kb)crypticplasmidpZM2ofZymomonasmobilisATCC10988intotheEscherichiacolivectorpBR328inthesiteofSphldigests.Thenewvector,7.656kbplasmidpZBl,hastwoselectivemarkers,AprandCm`.Thereareseveraluniquerestrictionsitesoneachselectivemarker,AhdI,Pstl,PvuIsitesonthemarkerofAp`andP
6、sp,EcoRl,NcolonthemarkerofCm`.TherecombinantplasmidpZBIhasbeenclonetoE.coliDH5aandZmobilisCP4successfully,anditsinbothhoststrainshasbeenexamined.Inthispaper,thegrowthofZmobilisATCC10988andCP4indifferentmediumiscompared.TheresultsshowthattheTmediumgivesthebeterculture.Twodifferentmethods,"SDS
7、-alkali"methodand"Nester"method,forpreparingplasmidsofZmobilishavebeencomparedinthispaper.TheplasmidpZM2hasbeencharacterizedbyrestrictionenzyme.KEYWORDS:Ethanol,Zymomonasmobilis,Shuttlevector,独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果.除了文中特别加以标注和致谢之
