padtrackcmvrhsg重组穿梭质粒载体的构建、序列分析与rhsg生物信息分析

《padtrackcmvrhsg重组穿梭质粒载体的构建、序列分析与rhsg生物信息分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要pAdtrack-cmv-rHSG重组穿梭质粒载体的构建、序列分析及rHSG生物信息分析摘要目的(1)在前期构建pExpress-1-rHSG重组质粒载体基础上，构建大鼠增殖抑制基因（rathyperplasiasuppressorgene,rHSG）pAdtrack-cmv-rHSG重组穿梭质粒并鉴定，为进一步构建腺病毒载体及脑血管痉挛的基因治疗提供物质基础；（2）对测序报告结果中rHSG基因序列进行序列与结构相关的生物信息分析,为认识该基因结构与功能提供借鉴。方法(1)目的基因的提取：复苏本室保存的含pExpre

2、ss-1-rHSG质粒的Jm109菌，用质粒抽取试剂盒抽取质粒pExpress-1-rHSG，并在PCR仪中扩增出目的基因rHSGcDNA。(2)穿梭质粒的构建及鉴定：①复苏本室保存的含腺病毒穿梭质粒pAdtrack-cmv的DH5α菌种，用质粒抽取试剂盒抽取质粒pAdtrack-cmv；②将PCR后rHSGcDNA连接到pGM-T质粒上，构建重组质粒pGM-T-rHSG，并对重组质粒进行限制性内切酶酶切鉴定；③将pGM-T-rHSG重组质粒在LB固体琼脂培养基上转化到大肠杆菌DH5α，提取pGM-T-rHSG质粒；④用BglⅡ、EcoRV对pGM-T-

3、rHSG重组质粒进行双酶切，提取目的基因并鉴定；⑤用BglⅡ和EcoRV双酶切pAdtrack-cmv质粒得到线性化的pAdTrack-CMV片断，在T4DNA连接酶下与目的基因连接，构建出重组pAdtrack-cmv-rHSG穿梭质粒，并对重组穿梭质粒pAdtrack-cmv-rHSG进行酶切鉴定；⑥将重组穿梭质粒送测序公司进行DNA序列分析。(3)rHSG基因生物信息分析：根据测序报告结果中rHSG基因序列，用生物信息学方法对其进行同源性、分子量、蛋白跨膜区、等电点、亲疏水性、蛋白二级结构等项的分析和预测。结果(1)从质粒pExpress-1-rHS

4、G中成功提取出了rHSGcDNA基因。(2)重组pAdtrack-cmv-rHSG穿梭质粒经BglⅡ和EcoRV双酶切后，进一步将重组体进行基因测序分析，验证了克隆的rHSGcDNA序列与GenBank[AF036536]公布的rHSG序列吻合。这一结果表明重组体pAdtrack-cmv-rHSG中插入的目的基因是正向、单倍插入。(3)rHSG生物信息分析结果I宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要显示，rHSG全长4151bp，编码一757氨基酸残基的蛋白，可能为一跨膜蛋白，经基因Genebank查询发现与人HSG基因序列有95.2%同源性。结论(1)

5、成功构建了大鼠增殖抑制基因(rathyperplasiasuppressorgene,rHSG)真核表达载体pAdtrack-cmv-rHSG，为深入研究rHSG功能和rHSG基因治疗脑血管痉挛奠定了物质基础；(2)分析rHSG基因序列及蛋白结构，有助于进一步研究该基因的分子和生物学功能。关键词增殖抑制基因；载体；基因重组；生物信息学II宁夏医科大学硕士研究生学位论文英文摘要Construction,IdentificationofpAdtrack-cmv-rHSGRecombinedShuttlePlasmidVectorandBioinformati

6、onAnalysisofrHSG.ABSTRACTObjective(1)BasedonformerconstructedrecombinantvectorpExpress-1-rHSG,toconstructandidentifytherecombinedvectorpAdtrack-cmv-rHSGcarryingratshyperplasiasuppressorgenewhichcanexpressineukaryotecellsandwhichwillprovidethebasisforfurtherresearchingthemechanism

7、sofadenoviralvectorandworkingoncerebralvasospasmgenetherapy.(2)Fromthesequencingreport,analyzetherHSGconsequenceandconstruction,inordertorecognizingtheconstructionandfunctionofthisgene.Methods(1)Extractionofthetargetgene:TOrecoverincludingpExpress-1-rHSGvectorJm109bacteria,isolat

8、ingpexpress-1-rHSGvectorfromplasmidinthe