尼古丁对大鼠髌腱肌腱干细胞生物学特性影响的实验研究

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1、東兩ｋ＊ｆ硕±学位论女尼古Ｔ对大鼠儀膊航膊干细胞生物学特性影喃的实验研究专业名敌：骨外科研究生姓名：张昕导师姓名：王晨２０巧年５月（８２０）目１４２２巧省自巧科学基金靑年基金项目（ＢＫ２０口巧４：本论文获国家自鮮科学基金巧年基金项１）：江＂＂创新基金项目（３２９０００２４０１）国家大学生创新训综计划（１２１０２８６０９０）；中东南大学基本科研业务巧，＂＂－－ＷＳＷ国博±后基金资助（２０１２Ｍ５２０９８３）；江苏省六大人才高巧资助项目（２０１３０５４）的资助ＴｈｅＥｆ

2、ｅｃｔｏｆＮｉｃｏｔｉｎｅｏｎｔｈｅＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆＲａｔＰａｔｅｌｌａｒＴｅｎｄｏｎ－ＤｅｒｉｖｅｄＳｔｅｍＣｅｌｌｓｉｎｖｉｔｒｏＡＴｈｅｓｉｓＳｕｂｍｉｔｅｄ化ＳｏｕｔｈｅａｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＦｏｒｔｈｅＡｃａｄｅｍｉｃＤｅｇｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅＢＹＺＨＡＮＧＸｉｎＳｕｅｒｖｉｓｅｄｂｐｙＰｒｏｆｅｓｓｏｒＷＡＮＧＣｈｅｎＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄ

3、ｉｃｉｎｅＳｏｕｔｈｅａｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＭａ２０１５ｙ东南大学学位论文独询性巧明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研巧工作及取得的研巧成果。尽我所知，论．除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外文中不包含其他人己经发表或撰写过的研巧成果。，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材輯与我一同工作的同志对本研巧所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。—後＞１片巧研究生签名：Ｂ巧气：东南大学学位论文使用授权声明东南大華、

4、中国科学技术信息研巧所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可Ｗ采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文挡的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期巧的保密论文外．允许论文彼査阅和借阅，可Ｗ公布（包括电子信息形式刊登）论文的全部内容或中、英文摘要等部分内容。论文的公布（包括Ｗ电子信息形式巧登）授权东南大学研巧生院如理。研究生签名：坐导师签名；中文摘要中文摘要尼古下对大鼠黯膊肌睡干细胞生物学特性影响的实验研究￣目的：ｄｏｎｄｅｒｉｖｅｄｓｔｅｍ

5、ｌｌＳＣｓ探讨体外巧古Ｔ对大鼠振階肌磨干细胞（ｔｅｎｃｅｓＴＤ），的细胞活力，，细胞早期调亡Ｗ及肌瞻相关基因表达的影巧揭示吸烟导致肌膊病变Ｗ及损伤肌膊延迟愈合潜在的细胞学发病机制。８Ｉ方法：无菌条件下取周龄ＳＤ大鼠的振膊，型胶原巧消化分离获得单个有核２细胞，Ｗ最适密度（５０个／ｃｍ）进行接种，细胞呈克隆样生长，获得原代ＴＯＳＣｓ。３基础培养细施至第代，行成骨、成脂、成软骨诱导分化鉴定其干细胞的特性。－－７６ｓ然后将其分为两组，实验组用不同浓度的尼古Ｔ培养基（ｉ（ｒＭ，ｉ〇ｍ，ｉｏｍ，

6、’４２１０Ｍ和１０Ｍ）干预，对照姐继续采用基础培养基（ＯＭ）培养。处理化、２４ｈ、４化和７化后分别应用四哇盐（ＮＯＴ）比色法检测尼古Ｔ对ＴＤＳＣｓ体外存活的影响７－，化后应用ＡｎｎｅｘｉｎＶＦＩＴＣ／ＰＩ双染法检测尼古了对ＴＤＳＣｓ体外早期调亡的影巧，实时巧光定量ＰＣＲ（ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ）检测肌膊相关基因Ｃｏｌｌａｌ和Ｓｅｘ的表达。结果：大鼠巧膊ＴＤＳＣｓ体外培养呈克隆样集落生长，首次换液后，细胞呈长梭形和多角形两种形态，传至第３代，细胞表现为成巧维细胞样的纺锋形和星形的

7、？成骨诱导７天扁平细胞ＴＤＳＣｓ，茜素红染色阳性１０；成脂诱导天，油红０染４－色阳性天，苏木精伊红染色阳椎。与对照组相比，实验组不同；成软骨诱导１浓度的尼古Ｔ干预下，ＴＤＳＣｓ的细胞活力呈下降庭势，呈时间依赖性和浓度依＂赖性，浓度高于１（ＴＭ时作用显著，差异具有统计学意义（ｐ＜０．０５）。流式细ｓｎｎｅｘ－胞仪检测ＴＤＳＣ早期调亡（ＡｉｎＶ＋／ＰＩ）的数量随着尼古Ｔ浓度的增加而増加，差异具有统计学意义（ｐ＜０．０５），同时，ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ检测结果显示：与－５ｍ对照组相比，实

8、验组中Ｃｏｌｌａｌ和Ｓｅｘ的ｍＲＮＡ表达水平均降低，浓度髙于１〇时作用思著，差异具有统计学意义（＜０）。ｐ．０５结论：大鼠振膊中可Ｗ分离培养出具有体外克隆形成Ｗ及多向分化潜能的肌踏干细胞。体外尼古下可抑制大鼠振腫ＴＤＳＣｓ的细胞活化导致ＴＤＳＣｓ早期调亡Ｉ东南大学硕±学垃论文同时抑制ＴＤＳＣｓ中成肌膊分化转录、细胞外基质合成相关基因的表达。这可能