低氧诱导因子-1α诱导的mg-63成骨细胞的凋亡分子机制研究

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1、分类号民６４１密级ＵＤＣ６１０编号１０傷武汉大学博ｉ学位论文－低氣诱导因子－ｌａ诱导的ＭＧ６３成骨细胞的调古分子机制研究研究生姓名：孙官文指导教师姓名、职称：彭吴教授专业名称；骨科研究方向：骨缺损修复基础及临床研究二〇－五年十月Ｗｕｈａ凸ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＤｏｃｔｏｒＴｈｅｓｉｓｏｆ－－－Ｔｈｅｓ化ｄＨＩＦｌａｉｎｄｕｃｅｄｈｏｘｉａｉｎｄｕｃｅｄｙｙｐｏｓ－ｔ；ｅｏｂｌａｓｔＭＧ６３ｃｅｌｌａｐｏｐｔ；ｏｓｉｓＢｙ；Ｓｕｎ

2、Ｇｕａｎｗｅｎ化化ｎＰｒｏｆ．ＰｅｎＨａｏｇＯｃｔｏｂｅｒ，２０１５郑重声明本人的学位论文是在导师指导下独立撰写并完成的，学位论文没有飄窃、抄袭、造假等违反学术道德、学术规范和侵权行为，否则，本人愿意承担由此而产生的法律责任和法律后果，特此郑重声明。学位论文作者（签名）／《年／月日Ｉ论文创新点１．为了更好的了解缺血缺氧引起的的晉折愈合不良或骨不连，我们在本研究中确定了ｍｃｒｏＲ－ｉＮＡ２１０在骨折标本和缺氧型成骨细胞中的表达情况，然后确定ｃｒｏＲＮＡ－２、了ｍｉ１

3、０的过量表达对成晉细胞的增殖调亡产生的影响。研究结果ｃｒｏ－２－显示，在临床人体骨折组织中ｍｉＲＮＡ１０表达量的上调与ＨＩＦｌａ因子的－－过量表达相关，且在ＭＧ６３成骨细胞依赖Ｈ圧ｌａ的缺氧型应答中表达量上－－－２。ＣＣＫ８的检测表明通过ｍｉｃｒｏＲＮＡ２１０类似物提高ｍｉｃｒｏＲＮＡ１调，０的表－－亡现象达量Ｗ减少化疗药物５氣尿嚼巧（５ＦＵ）诱导的成骨细胞死。另外集－落形成实验中显示ｍｉｃｒｏＲＮＡ２１０类似物能够促进成骨细胞的生长。此外，－－２ｍｉｃｒｏＲＮＡ１０类似物的转染能够通过抑制ｃａｓｐ

4、ａｓｅ３（细胞调亡蛋白酶３）和ｓａｓｅ９－ｃａｐ（细胞调亡蛋白酶９）的激活來抑制缺氧诱导型ＭＧ６３细胞的调亡ｃｒｏＲＮ－ｍ１现象。我们的研究表明ｉＡ２０在缺氧型应答中具有保护性作用，而且ｃｏＲ－ｍｉｒＮＡ２１０可能在骨折愈合中对成骨细胞也具有保护作用。２－－ｌ（．为了探讨低氧诱导因子ａＨＩＦｌａ）在低氧状态下所培养的原代鼠胚成骨细Ｌ胞中的具体表达情况Ａ及其与细胞调亡所致骨不连的关系，为临床治巧提供有参考价值的依据。取妊娠１９ｄ的ＫＭ小鼠的烦骨，应用改良组织块法培养原代鼠胚成骨细胞，同时对

5、细胞使用贴壁法纯化处理，再行对第３代培养的一４代细胞进行成骨细胞鉴定细胞计数持续周，同时对己经培养的第，并使－ｏ用巧钻染色法检测细胞的碱性磯酸酶。在１２５ｕｍｌ／Ｌ浓度的氯化钻常规ＤＭＥＭ培养液中培养第３代的成骨细胞，随后予Ｗ氯化钻化学模拟低氧状态，应用倒置相差显微镜观察低氧下培养的细胞并作好计数，随后将不同时间培养的成骨细胞设为０、１、３、５Ｗ及７ｄ缺氧组，并将常规氧条件下培养的第３０；。代细胞设为、１、３、５１＾１及７（１常规氧气组再对低氧组与常规氧气组不同－时间的成曾细胞进行检测，分析

6、Ｈｌａ表达。ＩＦ及调亡所致骨不连情况同时采－－用免疫印迹法检测成骨细胞中的Ｂｃｌ２与Ｃａｓａｓｅ３蛋白表达情况。我们通过ｐ实验证明改良组织块法具有传统组织块法所有的优点，能够短时间内得到较多的成骨细胞，，所培养细胞有典型的成骨细胞功能及形态在氯化钻化学模曲Ｆ－拟出的低氧状态下ｌａ，，促进成骨细胞调亡并产生大量的低氧诱导因子ａｓａｓｅ－３Ｂｃ－２该因子可Ｗ通过对Ｃｐ和ｌ蛋白的调节來促进成骨细胞发生调亡并致晉不连形成，且这种促进与缺氧的时间有着密切关系。学位论文使用授权书一一一》（式两份，期刊社

7、存档），份论文作者保存份交《中国博±学位论文全文数据库本论文作者完全了解学校关于保存、使用学位论文的管理办法及规定，即学校有权保留并向国家有关部ｎ或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查。阅和借阅，接收社会监督本人授权武汉大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入学校有关数据库和收录到《中国博±学位论文全文数据库》进行信息服务，也可Ｗ采用影印。、缩印或扫描等复制手段保存或汇编本学位论文一本论文提交□当年／□年／□两年／ＤＨ年Ｗ后，同意发布。注：密后适用于本授权书。保密学位论文，在解作者签名

8、：导师签名：化Ｉ／ｆ＾／／月６＾＾年月！為ｆｅ＾＾年Ｉ心／武汉大学硏究生学位论文作者信息论文题目Ｗ换一於知户键似解６衙ｔ詞甲Ｉ姓名学号兴化答辩日期＾矿年／＇月日巧＾，论文级别博ｉ：巧硕±口…院／系／所｜专业一若永夺＾誤｜却砰ＩＩＩ联系电话Ｅｍａｉｌ