抵抗素通过抑制lkb1ampk通路介导h9c2心肌细胞肥大

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1、分类号:R654.2学校代码：10114密级:学号：2012200436抵抗素通过抑制LKB1/AMPK通路介导H9c2心肌细胞肥大Resistin,throughInhibitionofLKB1/AMPK,PromotesCardiomyocyteHypertrophyinCulturedH9c2Cells研究生：刘鹏指导教师：邓勇志教授杨志明教授专业名称：外科学研究方向：心力衰竭的基础与临床研究学位类型：专业学位所在学院：第二临床医学院中国山西二〇一五年五月十五日目录中文摘要………………………………………………………………………………Ⅰ英文摘要………

2、………………………………………………………………………Ⅲ常用缩写词中英文对照表………………………………………………………………Ⅴ前言………………………………………………………………………………11材料与方法…………………………………………………………………………31.1实验材料…………………………………………………………………………31.2实验方法…………………………………………………………………………61.3统计学分析………………………………………………………………………142结果………………………………………………………………………………152.1H

3、9c2心肌细胞培养及生长情况…………………………………………………152.2抵抗素诱导心肌细胞面积测定结果分析………………………………………152.3抵抗素诱导心肌细胞单细胞蛋白含量的测定分析……………………………162.4抵抗素诱导心肌细胞凋亡率的测定……………………………………………172.5抵抗素诱导心肌细胞周期的测定分析…………………………………………182.6抵抗素诱导心肌细胞胚胎基因的变化…………………………………………192.7抵抗素对心肌细胞LKB1/AMPK信号通路蛋白的抑制………………………203讨论……………………………………………

4、…………………………………234结论………………………………………………………………………………25参考文献………………………………………………………………………………26综述………………………………………………………………………………28致谢………………………………………………………………………………37在学期间承担/参与的科研课题与研究成果……………………………………………38个人简历………………………………………………………………………………39山西医科大学硕士学位论文抵抗素通过抑制LKB1/AMPK通路介导H9c2心肌细胞肥大摘要目的：探讨抵抗素

5、通过调控LKB1/AMPK信号通路对H9c2心肌细胞肥大的影响及其可能的分子机制。方法：生长状态良好的H9c2心肌细胞，使用含0.1%胎牛血清的DMED高糖培养基饥饿24h后进行不同干预。实验分为4组，Con组：对照组；R50组：抵抗素50ng/mL组；（R50+Me2）组：抵抗素50ng/mL加二甲双胍2mmol/L组；Me2组：二甲双胍2mmol/L组。各组分别使用相应诱导剂处理48h后进行检测，显微镜镜照相系统拍照后使用ImageJ软件分析细胞表面积，细胞裂解后用BCA法测单细胞蛋白含量，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率，实时荧光定量PCR（RT

6、-qPCR）检测BNF、β-MHC的相对表达量。确定心肌细胞肥大模型建立成功之后，用50ng/mL抵抗素以30min，1h，2h，4h，8h，24h等不同的时间间隔处理细胞，用Westernblot分析p-AMPK、p-LKB1的表达，确定信号蛋白磷酸化水平与时间关系。最后分四组，Con为对照组，R50组和Me2组分别处理2h，（R50+Me2）组先用二甲双胍预处理1h后再抵抗素处理1h；分别用Westernblot分析p-AMPK、AMPK、p-LKB1、LKB1的表达量。结果：抵抗素能显著增加H9c2心肌细胞表面积、促进蛋白合成量和细胞凋亡，改变细胞

7、周期，并上调心肌细胞胚胎基因BNF、β-MHC的表达，而二甲双胍能明显逆转以上现象。抵抗素（50ng/mL）可显著抑制心肌细胞LKB1/AMPK信号通路蛋白磷酸化水平，并具有明显的时间依赖性，二甲双胍（2mM）可以逆转抵抗素介导的以上变化（P<0.001）。I山西医科大学硕士学位论文结论：抵抗素可通过抑制LKB1/AMPK信号通路介导心肌细胞肥大。关键词：抵抗素；LKB1/AMPK；心肌肥大II山西医科大学硕士学位论文Resistin,throughInhibitionofLKB1/AMPK,PromotesCardiomyocyteHypertroph

8、yinCulturedH9c2CellsABSTRACTObjective:Di