抗菌肽plectasin高效原核表达菌株的构建及表达条件优化的正交试验

《抗菌肽plectasin高效原核表达菌株的构建及表达条件优化的正交试验》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号密级编号ＵＤＣ＾Ａ？或；為妍淨硕ｉ学位论文抗菌肤Ｐｌｅｃｔａｓｉｎ巧效原核表达菌株的掏建及表达条件优化的正交试验－ｏｔｋｓｔｒａｓｏｒｉｈｌｅｖｅｌＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｒｏｋａ巧ｉｎｆｈｇｐ＊ｅｒｅｔＰｌｅｄａｓｉｎａｎｄｉｅｓｓｉｏｎｏｆｔｉｂａｃｔｉａｌｉｄｅｓ巧ｐａｎｐｐｅｏｍｉｚｅｄｅｘｒｅｓｓｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｒｔｈｏｏｎａｌｅｘｐｅｄｍｅｎｔｏｎ化ｐ枯ｐｇ朱哲教授—导师姓名陈新則专业

2、名務呼吸内科学型培巧类型专业２０１５年４月２６日论文巧交日期南方医科大学２０１２级硕击学位论文抗菌化Ｐｌｅｃｔａｓｉｎ高效原核表达菌株的构建及表达条件优化的正交试验－Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｒｏｋａｒｏ村ＣｓｔｒａｉｎｓｆｏｒｈｉｇｈｌｅｖｅｌｐｙｅｘｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｅｔｉｄｅｓＰｌｅｃｔａｓｉｎａｎｄｐｐｐｏｒｔｈｏｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｏｎｔｈｅｏｐｔｉｍｉｚｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｇｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ课题来源；

3、广东省教育部产学研结合项目口０１０Ｂ０９０４００５４０）学位申请人朱哲导师独名陈新副教授专业違称呼吸内科学培养类型专业型培养层次硕去研究生所在学焼第二临床医学院２０１５年４月２６曰广州硕去学位论文抗菌肋Ｐｌｅｃｔａｓｉｎ高效原核表达菌株的构建及表达条件优化的正交试验硕壬研究生：朱哲指导教师：陈新副教授摘要【背景】随着广谱抗生素在临床上的广泛应用，革兰氏阳性球苗细苗耐药性问题日益严峻，这増加了疾病治愈的难度并给患者和社会带来了严重的经济负担。细。菌耐药产生的原因是多

4、方面的，其中抗茜药物的广泛使用和滥用最为主要抗生素的长期大量使用除了诱发细苗的广泛耐药么外，还会导致诸多不良反应和、毒副作用，如肝肾功能损害血液和神经系统毒性、胃肠道反应等，这些不良反应也同样影响了敏感抗生素在治疗耐药革兰阳性球菌感染中的选择，因此开一发新代具有生物活性的抗菌物质显得尤为迫切和必要。一、抗茵肤是种具有髙效抗茵抗病毒和免疫调节功能的多肤，是动物先天免疫的重要组成部分。研究表明：抗菌化广泛存在于各种生物体内，对细菌、真菌。、病毒、原虫甚至癌细胞都有不同程度的抑制和杀灭作用与传统抗生素相比，抗菌肤因作用机

5、制独特而不易产生耐药性，部分抗菌肤还具备免疫调节活性。目前已有多种抗菌肤进入临床试验阶段。美国Ｍａｇａｉｎｉｎ公司开发的抗菌肤Ｐｅｘｉｇａｎａｎ已成功应用于临床治疗糖尿病足感染。２００２年从腐生真茵中发现新—型抗菌肤菌丝霉素Ｐｌｅｃｔａｓｉｎ，它对肺炎球菌、金黄色葡萄球茵及肠球菌包，括耐药型的肺炎球菌和耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）都有良好的杀灭一这ｅｃｔａｓｉｎ作用，且毒副作用非常小，发现显示了Ｐｌ的强大的应用潜力。生物体内天然抗菌肤含量很低，直接分离纯化步骤繁杂耗时，而通过化学Ｉ一合成的方法大

6、量生产抗菌狀则价格昂贵，因此，寻找种更具成本效益的生产一方法成为抗菌肤产业化的又关键点。随着生物技术的逐步成熟和市场的需要一呈上升趋势，重组抗菌肤成为多肤类药物产业化的主要方向之。目前，大多数抗菌肤由像大肠杆菌表达系统这样的原核表法系统表达，但使用大肠杆菌表达系统生产Ｐｌｅｃｔａｓｉｎ目前报道较少。原核表达系统直接表达抗菌肤存在Ｗ下问２、：１、大多数抗茵肤对大肠巧茵有抗菌活性题；大多数表达蛋白包涵体的形式存在３、；４、表达的蛋；大肠杆菌缺乏翻译后修饰和加工功能白容易被蛋，白酶降解，；针对上述问题目前通常采用融合表达策略

7、来解决利用不同功能的分子伴侣与抗菌肤在大肠杆茜中进行融合表达可Ｗ降低抗菌肤对宿主的毒害作用，提高表达蛋白可溶性和稳定性，并且可Ｗ设计特定的裂解位点释放抗菌肢。一随着生物技术的飞速发展，利用微生物发酵生产抗菌化不失为种经济高效的方法。构建高效重组大肠杆菌系统表达抗菌肤Ｐｌｅｃｔａｓｉｎ，对表达的Ｐｌｅｃｔａｓｉｎ进行体外活性检测，并对其表达条件进行优化，对推动针对耐药革兰阳性球菌一抗菌狀的研发具有积极意义感染的新型抗茵药物。【目的】本实验拟选取硫氧还蛋白（ＴｒｘＡ）、小泛素相关修饰物（ＳＵＭＯ）、内含狀－（虹

8、ｔｅｉｎ２）、谷脫甘肤Ｓ转移酶（ＧＳＴ）四种不同的分子伴侣分别构建重组大肠－－－－Ｏｒｉａｍ－＋－－－－杆菌菌株ｇｉｐＥＴ３２ａ（