抗ev71病毒单克隆抗体及柯萨奇病毒病毒样颗粒的制备研究

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1、中文图书分类号：R183.4密级：公开UDC：578学校代码：10005博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：抗EV71病毒单克隆抗体及柯萨奇病毒病毒样颗粒的制备研究论文作者：张潇学科：生物医学工程指导教师：盛望教授论文提交日期：2015年6月UDC：578学校代码：10005中文图书分类号：R183.4学号：B201215010密级：公开北京工业大学工学博士学位论文题目抗EV71：病毒单克隆抗体及柯萨奇病毒病毒样颗粒的制备研究英文题目STUDYON：ANTI-EV71MONOCLONALANTIBO

2、DYANDCOXSACKIEVIRUSVIRUS-LIKEPARTICLES论文作者：张潇学科：生物医学工程研究方向：抗病毒药物和疫苗的研究申请学位：工学博士指导教师：盛望教授所在单位：生命科学与生物工程学院答辩日期：2015年6月授予学位单位：北京工业大学UDC:578Universitycode:10005Classifiedcode:R183.4Graduatenumber:B201215010Confidentialdegree:OpenDissertationforDoctorDegreeinEngineering

3、ofBeijingUniversityofTechnologyStudyOnAnti-EV71MonoclonalAntibodyAndCoxsackievirusVirus-LikeParticlesCandidate:ZhangXiaoMajor:BiomedicalEngineeringResearchDirection:ResearchonAntiviralMedicinesandVaccineDegree:DoctorofEngineeringSupervisor:ProfessorShengWangFaculty

4、:CollegeofLifeScienceandBioengineeringDateofDefense:June,2015University:BejingUniversityofTechnology独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得北京工业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。签名：张

5、潇日期：2015年6月19日关于论文使用授权的说明本人完全了解北京工业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。（保密的论文在解密后应遵守此规定）签名：张潇日期：2015年6月19日导师签名：盛望日期：2015年6月19日摘要摘要手足口病（Handfootandmouthdisease，HFMD）是一种多见于婴幼儿的病毒流行性传染疾病，其流行疫情主要集中于亚太地区，2008年被纳入我国丙类传染病。手足口

6、病流行范围广，是一种自愈性疾病，然而少数患儿伴有急性弛缓麻痹、脑干脑炎和脑膜脑炎等神经系统疾病，重症死亡率高，并呈逐年增长趋势，作为新发传染病，手足口病严重影响着我国婴幼儿的生命健康。手足口病的主要致病病原体包括肠道病毒71型（Enterovirus71）与柯萨奇病毒A16型（CoxsackievirusA16，CVA16），其中EV71病毒是造成的HFMD重症及死亡的主要病原体。目前，手足口病还没有有效的治疗方法。为了开发具有临床应用潜能的手足口病重症治疗药物，本课题展开了相关的研究工作，包括以下两个部分。第一，利用噬菌体

7、展示技术分离制备可识别EV71病毒衣壳蛋白VP4高度保守多肽（VP4N20）的人鼠嵌合单克隆抗体。免疫学实验结果显示其中一株抗体A-M001在体外既可以中和EV71病毒亦可以中和CVA16病毒，具有广谱中和病毒活性。第二，本研究利用单细胞基因扩增技术尝试从感染EV71病毒患儿体内分离具有中和EV71病毒活性的全人源单克隆抗体。共分离得到137株单克隆抗体,有4株抗体在体外表现出不同程度的中和EV71病毒活性。其中，单克隆抗体hmAb136在体外表现出最强的中和EV71病毒活性。该抗体在体外既可以中和EV71-A亚型病毒亦可以

8、中和EV71-C4亚型病毒。针对EV71-A和EV71-C4亚型病毒的体外半数抑制浓度分别是：IC50=0.071μg/mL和IC50=0.040μg/mL。体内中和实验显示单克隆抗体hmAb136在300ng/g剂量条件下可以完全保护小鼠抵抗致死剂量EV71病毒攻击，其IC50=0.05