鸡血藤提取物抗柯萨奇b3病毒活性组分研究

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1、鸡血藤提取物抗柯萨奇B3病毒活性组分研究作者：郭金鹏，庞佶，王新为，谌志强，金敏，李君文【摘要】目的研究鸡血藤提取物不同组分的抗柯萨奇B3病毒活性和性质。方法通过不同溶剂提取鸡血藤活性成分，细胞病变效应法和四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)测定不同提取组分的体外抗柯萨奇B3病毒活性。结果通过初步分离纯化得到有效成分具有抗柯萨奇B3病毒活性。用MTT法研究了鸡血藤水提物和有效成分的细胞毒性和抗柯萨奇B3病毒活性，CC50分别为725.88，179.17μg/ml，IC50分别为87.17，9.14μg/ml，TI分别为8.32，19.60。阳性对照为利巴韦林(Riba

2、virin)的CC50为4900μg/ml，IC50为156.2μg/ml，其TI为31.4。结论鸡血藤有效成分在体外能明显抑制柯萨奇B3病毒的致细胞病变作用。【关键词】鸡血藤;柯萨奇B3病毒;四甲基偶氮唑盐比色法;细胞病变效应法　　Abstract：ObjectiveToassaytheanti-coxsackievirusB3effectsofthedifferentextractsfromSpatholobussuberectusDunn.MethodsTheanti-coxsackievirusB3activityoftheextractsofSpath

3、olobussuberectusDunn.ethodandMTTmethod.ResultsByre-extractingSpatholobussuberectusDunn.maintainingantiviralactivityl,87.17μg/ml,8.32and179.17μg/ml,9.14μg/ml,19.60,respectively,measuredbyMTTmethodarkableanti-CoxsackievirusB3activityinvitro.　　Keyethod;CPEmethod　　柯萨奇病毒B3(Coxsackievirusg

4、roupBtype3，CVB3)是病毒性心肌炎的主要病原[1,2]，病毒持续感染可导致扩张型心肌病[3,4]。目前，临床缺乏有效的抗病毒治疗药物。鸡血藤是一味沿用千年的活血化淤中药,古代多篇本草论著中都记载了其“去淤血，生新血”的功效，并称之为“血分之圣药”[5]。中医认为其有补血活血、舒筋活络的功能，用于治疗月经不调、血虚萎黄、麻木瘫痪、风湿痹痛等症[6]。现代临床常用鸡血藤(单用或以鸡血藤为主组方)治疗各种原因(如放化疗、血液系统疾病)引起的白细胞、血小板、红细胞等全血象减少疾病[7]。近年来对鸡血藤化学成分和药理学研究证明，在抗肿瘤、抗氧化、抗病毒等方面具

5、有较好的作用。实验证明，密花豆(鸡血藤原材的一种)提取物对单纯疱疹病毒Ⅰ型有较强的作用，且细胞毒性低，其50%细胞致死浓度(CC50)为阿糖胞苷的3倍，选择毒性指数(ST)与阿糖胞苷相同。密花豆总提取物和其聚酰胺柱层析成分在抗HIV逆转录酶(HIV-RT)活性抑制实验中显示出较强的作用，当浓度为0.4μg/ml其抑制率为83.12%～94.01%，当浓度为1μg/ml其抑制率为97.5%～99.86%，当浓度为2μg/ml可完全抑制HIV-RT的活性[8]。厚果鸡血藤水提物和乙醇提取物除具有抑制HIV-RT的活性外，并且可抑制DNA多聚酶和RNA多聚酶[9]。鸡

6、血藤抗病毒作用的研究目前仅局限于疱疹病毒和艾滋病毒等。本研究将鸡血藤水提液针对肠道病毒属柯萨奇B3病毒进行了体外抗病毒实验，并对有效成分进行了初步提取和分离，以期为在抗病毒方面的广泛应用提供数据。　　1材料与仪器　　1.1材料鸡血藤SpatholobussuberectusDunn.购自天津达仁堂药店。细胞，非洲绿猴肾细胞(VeroE6cellline)，本室保存。病毒，CoxsackievirusB3(CVB3)，柯萨奇病毒B3，本室保存。　　1.2试剂培养基，RPMI-1640(GIBCO产品)按照说明溶解，调节至pH7.2，G5砂芯漏斗过滤除菌，加入胎牛血

7、清(天津川页有限公司)至浓度为10%，100U/ml青霉素(重庆药友制药有限责任公司)和100μg/ml硫酸链霉素(上海四药股份有限公司)，胰蛋白酶(GIBCO产品)，噻唑蓝(MTT，Sigma产品)，50ml培养瓶、96孔培养板(Costar产品)，利巴韦林注射液(Ribavirininjection，上海通用药业股份有限公司，批号040661);磷酸缓冲液PBS(不含Ca2+，Mg2+)：自配，所用化学试剂为国产分析纯，D-101大孔树脂为天津海光化工厂产品。　　1.3仪器砂芯漏斗，G5吉林省长春市玻璃制品厂。酶标仪，芬兰Labsystem公司。真空冷冻干燥

8、机，LABCONCO产品