槟榔提取物体外抗柯萨奇病毒B3及单纯疱疹病毒1型和乙型肝炎病毒的研究

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1、槟榔提取物体外抗柯萨奇病毒B3及单纯疱疹病毒1型和乙型肝炎病毒的研究作者：王小燕张美英王亚峰郝静刘秋英王一飞张颖君杨崇仁【摘要】目的从槟榔9种提取物中体外筛选出抗柯萨奇病毒B3，单纯疱疹病毒1型活性成分，从其中3种提取物中体外筛选出抗乙型肝炎病毒的活性成分。方法通过观察药物毒性、病毒引起的细胞病变效应、MTT法，判断药物毒性及药物抗病毒效应。结果槟榔9种提取物对Hela,Vero细胞具有一定的毒性，而无抗病毒活性，3种提取物不能有效地抑制细胞HBeAg的表达。结论槟榔9种提取物体外无抗柯萨奇病毒B3、单纯疱疹病毒1型的作用，3种提取物体外无抗乙型肝炎病毒的作用。【关键词】槟榔；柯

2、萨奇病毒；单纯疱疹病毒1型；乙型肝炎病毒Abstract:ObjectiveToscreennineextractsofArecacatechuL.foranti-CoxackievirusB3,HSV-1andthreeextractsofArecacatechuL.foranti-HBVintoxicandantiviraleffectwasevaluatedbyobservingtoxiceffect,cytopathiceffect(CPE),MTTcolorimetricassayforvitalcellextractshadcertaintoxiceffectsonH

3、elaandVerocellsinvitro,buttheyhadnoantiviralactivities.ThreeextractsofArecacatechuL.couldnotinhibittheexpressionof'sHBeAg.ConclusionNineextractsofArecacatechuL.havenoeffectofanti-CoxackievirusB3，HSV-1andthreeextractsofArecacatechuL.havenoanti-HBVinvitro.Keywords:ArecacatechuL.;CoxsackievirusB

4、(CVB3);HSV-1;HBV　　槟榔为棕榈科植物，临床常用其干燥成熟种子。长期的临床实践证明,槟榔具有健胃消食、行气利水、杀虫泻下、利湿除疸的功效［1］。本实验以柯萨奇病毒B3感染Hela细胞，单纯疱疹病毒1型感染Vero细胞和细胞，以槟榔的鲜花、果实、花苞不同部位的9种提取物体外抗柯萨奇病毒B3、单纯疱疹病毒1型和其中花苞的3种提取物体外抗乙型肝炎病毒进行了研究。　1材料与仪器药物槟榔9种提取物由中国科学院昆明植物研究所提供。植物样品，粉碎，醋酸乙酯提取，甲醇提取，热水提取，依次得到醋酸乙酯提取物、甲醇提取物和水提物。醋酸乙酯提取物、甲醇提取物用二甲基亚砜溶解1mg/ml，

5、水提物用水溶解高压灭菌1mg/ml。细胞Hela细胞株、Vero细胞株引自美国ATCC。细胞生长液为含10%新生小牛血清的DMEM,细胞维持液为含2%新生牛血清的DMEM,常规加入青霉素100U·ml-1，链霉素100U·ml-1。细胞HBVDNA经克隆转染入肝癌细胞(HepG2)的细胞系,由武汉大学医学院病毒研究所提供。病毒柯萨奇B病毒(CVB)由武汉大学医学院病毒研究所提供。病毒在HepG-细胞中活化增殖后,其滴度为10-TCID50·ml-1,实验用100TCID50·ml-1。单纯疱疹病毒1型由武汉大学医学院病毒研究所提供。病毒在Vero细胞中活化增殖后,其滴度为10-T

6、CID50·ml-1,实验用100TCID50·ml-1。试剂及仪器DMEM培养基(Hyclone公司);病毒唑(利巴韦林注射液,Ribavirininjection广州市市桥药业有限公司);无环鸟苷(ACV)购于湖北科益药业股份有限公司;CO培养箱(日本Sanyo公司);超净工作台(苏州净化设备公司);相差显微镜(德国Laica公司);酶标仪(美国BIO-RAD公司)。MTT为Sigma公司产品。　2方法.1抗CVB3实验.药物毒性实验在96孔培养板上加入×105/ml浓度的Hela细胞，100μl/孔，培养2h，待其生长为单层细胞，弃去培养液，将槟榔9种不同提取物用维持液配制

7、成不同浓度的药液，加入到细胞中，每个浓度设4个复孔，同时设正常细胞对照组、阳性对照组，置37℃，5％CO培养箱里培养4h，其间置倒置显微镜下观察，观察药物的最大无毒浓度。.药物药效学实验在96孔培养板上加入×10/ml浓度的Hela细胞，100μl/孔，培养2h，待其生长为单层细胞，弃去培养液，不同稀释度的药物和病毒各50μl混合后直接加到单层Hela细胞上，每个浓度设4个复孔，同时设正常细胞对照组、病毒对照组、阳性药物对照组，置37℃，5％CO培养箱里培养24～3h，其间置倒置