肠道病毒71型(ev71)与柯萨奇病毒a组16型(ca16)单克隆抗体治疗的可行性评价

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1、厦门大学学位论文原创性声明本人呈交的学位论文是本人在导师的指导下独立完成的研究成果。本人在论文写作中参考其他个人或集体己经发表的研究成果，均在文中以适当方式明确标明，并符合法律规范和《厦门大学研究生学术活动规范(试行)》。另外，本学位论文为夏宁邵课题组的研究成果，获得国家科技重点项目(2010ZX09401—403)，国家自然科学基金(81371817)，国家自然科学青年基金(30925030)课题经费的资助，在厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心实验室完成。声明人(签孙卉为磊摹力护fr年f月嘭日J蚴㈣删㈣4舢删删Y2563523厦门大学

2、学位论文著作权使用声明～⋯一～本人同意厦f1A学根据《中华人民共和国学位条例暂行实施办法》等规定保留和使用此学位论文，并向主管部门或其指定机构送交学位论文(包括纸质版和电子版)，允许学位论文进入厦门大学图书馆及其数据库被查阅、借阅。本人同意厦f-JA学将学位论文加入全国博士、硕士学位论文共建单位数据库进行检索，将学位论文的标题和摘要汇编出版，采用影印、缩印或者其它方式合理复制学位论文。本学位论文属于：()1．经厦门大学保密委员会审查核定的保密学位论文，于年月日解密，解密后适用上述授权。(L／2．不保密，适用上述授权。(请在以上相应括号内打“√"或填上

3、相应内容。保密学位论文应是已经厦门大学保密委员会审定过的学位论文，未经厦门大学保密委员会审定的学位论文均为公开学位论文。此声明栏不填写的，默认为公开学位论文，均适用上述授权。)声明人(签孙1苫镯w7丫年箩月衫日摘要肠道病毒71型(EV71)与柯萨奇病毒A组16型(CAl6)是引起儿童手足121病(HFMD)的主要病原体。近些年来，手足口病在我国的发病率逐年上升，由手足口病导致的重症感染和死亡人数也明显增加，严重危害了儿童的生命安全，因此急需有效的治疗性药物来治疗并控制其感染与流行。单克隆抗体由于具有毒性低、特异性高等优点，是治疗病毒性感染的良好的候选

4、药物。本研究的目的为优化EV71的小鼠攻毒模型同时建立稳定的CAl6小鼠感染模型，并利用动物模型筛选和评价具有治疗潜力的EV71及CAl6治疗性单抗，为开展EV71及CAl6治疗性药物研制提供基础。本研究首先对原有的EV71动物模型的攻毒方式和攻毒剂量进行了优化，使该模型能够达到稳定的100％致死率。同时利用13株CAl6临床分离株对1日龄新生鼠进行攻毒评价，结果发现大多数CAl6病毒对小鼠表现出了强毒力，攻毒小鼠表现出瘫痪和肢体麻痹等神经症状。病理学检测显示攻毒小鼠的大脑和脊髓等部位出现了严重的坏死与炎症，与CAl6在人体内的感染情况极为相似。基于

5、上述结果，本研究建立了通过灌胃注射CAl6感染1日龄BALB／c小鼠的CAl6小鼠感染模型，为开展后续研究提供了重要基础。本研究应用所建立的CAl6攻毒模型对CAl6中和单抗的体内治疗效果进行评价，并根据体内外实验的结果确立了一株候选的CAl6中和单抗14810。通过评价感染CAl6后不同治疗时间点及治疗策略的效果发现，14810在攻毒后2天内进行单针治疗能够达到超过90％的治疗存活率，而利用三针治疗方案则能够在攻毒后第3天、即小鼠开始发病前1天有效治疗小鼠，从而证实了14810对CAl6的感染具有良好的体内治疗能力。本研究进一步应用EV71攻毒模型

6、对13株EV71中和单抗的体内治疗能力进行筛选评价，从而确立了一株EV71中和单抗CTllF9。通过对攻毒EV71后不同治疗时间和治疗策略的评价发现，CTllF9在攻毒后三天内进行单针治疗能够达到100％的存活率及健康率，而利用三针治疗方案则能够在攻毒后第4天、即小鼠开始发病时有效提高小鼠的存活率，且对瘫痪小鼠具有一定的治疗能力。摘要通过与人血清的阻断ELISA实验发现，CTllF9识别的表位在人血清中是免疫优势的。至此证实了CTllF9对EV71感染具有良好的体内治疗能力。综上所述，本研究优化了原有的Ev71动物模型的攻毒参数并建立了稳定的CAl6

7、小鼠感染模型，利用该模型成功筛选并获得了对EV71或CAl6感染具有良好治疗能力的中和单抗。这些研究为研发EV71及CAl6治疗性抗体提供了重要的数据支持与理论基础。关键词：肠道病毒7l型；柯萨奇病毒A组16型；动物模型；治疗性抗体IIAbstractEnterovirus71(EV71)andCoxackievirusAtype16(CAl6)arethemajorcausativereagentsofhand，footandmouthdisease(HFMD)．Inrecentyears，theincidenceofHFMD，thenumbers

8、ofseverecasesanddeathsweresignificantlyincreasedinChin