应用shrna敲减il k对胶质瘤细胞系u251增殖、迀移、侵袭、肿瘤形成影响

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1、密级：学校代码：10075分类号：学号：20121769医学硕士学位论文应用shRNA敲减ILK对胶质瘤细胞系U251增殖、迁移、侵袭、肿瘤形成影响学位申请人：王光翌指导教师：李春晖学位类别：医学硕士学科专业：外科学授予单位：河北大学答辩日期：二○一五年六月ClassifiedIndex:CODE:10075U.D.C:NO:20121769ADissertationfortheDegreeofM.MedicineTheeffectofknockdownILKbyshRNAontheproliferation,m

2、igrationandinvasionofhumangliomacellU251Candidate:WangguangyiSupervisor:LichunhuiAcademicDegreeAppliedfor:MasterofMedicineSpecialty:SurgeryUniversity:HebeiUniversityDateofOralExamination:June,2015河北大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中

3、特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得河北大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了致谢。作者签名：日期：純年义月日学位论文使用授权声明本人完全了解河北大学有关保留、使用学位论文的规定，§卩：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布论文的全部或部分内容，可以釆用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本学位论文属于1、保密口，在年月日解密后适

4、用本授权声明。2、不保密^/。(请在以上相应方格内打“V”)保护知识产权声明本人为申请河北大学学位所提交的题目为（应用shRNA敲减ILK对胶质瘤细胞系U251增殖、迁移、侵袭、肿瘤形成影响）的学位论文，是我个人在导师（李春晖）指导并与导师合作下取得的研究成果，研究工作及取得的研究成果是在河北大学所提供的研究经费及导师的研究经费资助下完成的。本人完全了解并严格遵守中华人民共和国为保护知识产权所制定的各项法律、行政法规以及河北大学的相关规定。本人声明如下：本论文的成果归河北大学所有，未经征得指导教师和河北大学的书面

5、同意和授权，本人保证不以任何形式公开和传播科研成果和科研工作内容。如果违反本声明，本人愿意承担相应法律责任。声明人••查-日期：年广月^曰日期：年」一月日摘要摘要目的：探讨应用shRNA敲减ILK后对人脑胶质瘤细胞U251增殖、迁移、侵袭及体外肿瘤形成的影响实验方法：1）应用shRNA发转染人脑胶质瘤细胞U251系后获得稳定转染细胞株；为了明确已经从转录及翻译水平均稳定敲减ILK表达水平，实验采用RT-PCR、Westernblot分别测定转染前后U251人脑胶质瘤细胞中ILK的mRNA以及其蛋白表达情况；2）s

6、hRNA-ILK对细胞增殖能力影响⑴应用CCK-8法检测定shRNA转染后细胞吸光度值改变，进而了解敲减ILK后对增殖速度的改变；⑵流式细胞术（FCM）检测转染前后细胞增殖周期变化；⑶免疫荧光法检测Ki67的表达水平；为了明确细胞周期蛋白D1（CyclinD1）的转录及其蛋白表达水平，实验采用RT-PCR、Westernblot分别检测。3）shRNA-ILK对细胞迁移能力及侵袭能力影响⑴Transwell小室检测敲减ILK表达后，U251细胞迁移、侵袭能力的改变；⑵免疫荧光法检测E-cadherin的表达；RT

7、-PCR、Westernblot分别检测E-cadherin、Snail转录及其蛋白表达情况；4）人脑胶质瘤U251裸鼠移植瘤模型建立和观测。实验结果：⑴稳定转染的U251细胞ILK蛋白和mRNA表达水平明显下降；⑵敲减ILK表达的U251细胞株增殖、迁移及侵袭能力降低；与增殖（Ki67、CyclinD1）、迁移及侵袭（E-cadherin、Snail）相关的指标有明显变化，这些指标表达水平与对照组比较均有显著性差异（P<0.05）；⑶应用shRNA敲减ILK表达细胞株裸鼠成瘤能力明显降低。结论：应用shRNA敲

8、减ILK表达的U251胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭及成瘤能力均显著降低，因此ILK可能是抑制胶质瘤的重要基因。I关键词ILKshRNA胶质瘤增殖迁移侵袭AbstractAbstractObjective:Toinvestigatethechangeofproliferation,migration,invasionandtumorigenesisofhumanbraing