大黄素对肠上皮细胞紧密连接蛋白损伤的保护作用研究

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1、分类号：R2-031学校代码：10062密级：学号：2012602508硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：大黄素对肠上皮细胞紧密连接蛋白损伤的保护作用研究TITLEStudyofprotectiveeffectofemodinondamageoftight-junctionproteinofintestinalepithelialcells一级学科：中西医结合二级学科：中西医结合临床论文作者：闫丽娜指导教师：傅强教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R2-031学校代码：10062密级：学号：2012602508学位类别：科学学位

2、专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：大黄素对肠上皮细胞紧密连接蛋白损伤的保护作用研究TITLEStudyofprotectiveeffectofemodinondamageoftight-junctionproteinofintestinalepithelialcells一级学科：中西医结合二级学科：中西医结合临床论文作者：闫丽娜指导教师：傅强教授导师组成员：李志刚天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的

3、内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密√。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期

4、：年月日天津医科大学硕士学位论文中文文摘目的：胎儿结肠上皮细胞（FHC）经缺氧/再复氧（H/R）和脂多糖（LPS）处理，观察紧密连接蛋白表达量及分布的变化，观察低氧诱导因子-1（HIF-1）和核转录因子-B（NF-B）及其下游信号通路表达的变化，并探究大黄素干预对紧密连接蛋白及各通路的影响。方法：胎儿结肠上皮细胞株（FHC）经缺氧再复氧和脂多糖处理来模拟肠上皮细胞的缺血/再灌注损伤。共分为4组：常氧组：用温度为37℃，含95%空气和5%CO2温箱，用含10％胎牛血清（Gibico）的DMEM：F12培养基培养细胞作为正常对照。H/R+LPS组：于37℃下将

5、细胞放入含1%O2，94%N2，5%CO2混合厌氧气体的厌氧培养箱3h后复氧培养2h，同时给予LPS为1mg·L-1的含10％胎牛血清（Gibico）的DMEM：F12培养基刺激。大黄素干预组：处理为在的基础上给予80μmol·L-1大黄素进行干预。DMOG处理组：常氧37℃培养条件下加用二甲基乙二酰基甘氨酸(DMOG)10mM处理5h。用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测紧密连接蛋白ZO-1、occludin、低氧诱导因子-1（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）、磷酸化核转录因子-B抑制蛋白-（pIB-）、磷酸化核转录因子-

6、Bp65（pNF-Bp65）、环氧化酶-2（COX-2）；间接免疫荧光观察紧密连接蛋白ZO-1的分布。结果：HR+LPS组，DMOG处理组，大黄素干预组的ZO-1表达量均较常氧组减少，大黄素干预组较HR+LPS组表达量多（p<0.05），HR+LPS组，DMOG处理组，大黄素干预组的occludin表达较常氧组减少，差异无统计学意义（p>0.05）;免疫荧光结果显示，常氧组细胞紧密连接蛋白ZO-1沿细胞膜分布，连续圆滑，排列规则，DMOG处理组的ZO-1表达明显减少，不连续；HR+LPS组表达量减少，排列不规则，不连续，出现断裂，锯齿状等分布，大黄素干预组较HR+

7、LPS组相比，表达量稍多，排列不规则缓解，偶有不连续，断裂等分布；与常氧比较，HR+LPS组，DMOG处理组，大黄素干预组HIF-1/NF-B－COX-2信号通路各因子表达量均升高（p<0.05），大黄素干预组较HR+LPS组相比，HIF-1/NF-B－COX-2信号通路因子表达减低(p<0.05)；与常氧组比较，HR+LPS组，DMOG处理组，大黄素干预组VEGF表达均升高（p<0.05）大黄素干预组VEGF表达较HR+LPS组表达减少（p<0.05）。结论：缺氧再复氧与脂多糖刺激肠上皮细胞可使其紧密连接蛋白表达减少，结I天津医科大学