大自噬在小胶质细胞介导的神经炎症及多巴胺神经元损伤中的作用

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1、SOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论j大自噬在小胶质细胞介导的神经炎症研究生姓名刘春风胡丽芳指导教师姓名专业名称研究方向论文提交日期苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：f^曰期：

2、邮.°『朴苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息趼究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文5可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在年—月解密

3、后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名：免岣辦日期：导师签名：‘日恥邮对1y大自噬在小胶质细胞介导的神经炎症及多巴胺神经元损伤中的作用中文摘要大自噬在小胶质细胞介导的神经炎症及多巴胺神经元损伤中的作用中文摘要目的：大自噬在小胶质细胞介导的神经炎症及多巴胺神经元损伤中的作用。方法：以BV2细胞和原代小胶质细胞为研究对象，采用肿瘤坏死因子（TNF-α）和细菌脂多糖（LPS）建立细胞炎症模型。第一部分：采用Westernblot法检测自噬相关蛋白LC3（microtubule-associatedprot

4、einlightchain3）、p62及Beclin1的表达水平；Q-PCR法检测小胶质细胞M1和M2表型marker的mRNA水平的变化；第二部分：采用定量和逆转录PCR（QuantitativeandreversetranscriptionPCR）检测M1表型marker(iNOS、IL-1β)以及M2表型marker(Arginase、Ym1/2)mRNA水平的变化；用研究自噬的工具药（雷帕霉素,白藜芦醇,3甲基腺嘌呤）、血清剥夺和敲减自噬相关基因Atg5，Q-PCR法检测M1及M2表型mar

5、kermRNA水平的变化；第三部分：将原代小胶质细胞培养的上清以1:2的比例和神经元培养基混合后，和原代中脑神经元共同培养24h，通过CCK8检测不同组别原代中脑神经元细胞的活力，并通过免疫荧光以MAP-2标记神经元观察神经元突起的变化。结果：第一部分：TNF-α（1ng/ml和5ng/ml）作用于小胶质细胞可以使自噬相关蛋白LC3、Beclin1、p62升高（P<0.05），激活自噬；TNF-α（5ng/ml）作用于小胶质细胞，可以使小胶质细胞M1marker(iNOS、IL-1β)的mRNA水平

6、升高（P<0.05），而M2marker(Arginase、Ym1/2)的mRNA水平下降（P<0.05）。第二部分：在TNF-α(5ng/ml)和LPS（100ng/ml）作用于小胶质细胞的细胞模型上，用研究自噬的工具药上调自噬，可以发现小胶质细胞M1marker(iNOS、IL-1β)的mRNA水平下降（P<0.05）而M2marker(Arginase、Ym1/2)的mRNA水平升高（P<0.05）；而下调自噬，观察到相反的变化。I中文摘要大自噬在小胶质细胞介导的神经炎症及多巴胺神经元损伤中的

7、作用第三部分：通过CCK8检测神经元活力发现，和单独TNF-α作用组的小胶质细胞上清共培养后神经元活力下降；神经元和抑制自噬组的小胶质细胞条件培养上清共培养后，中脑神经元活力下降更明显；同样和抑制自噬组的小胶质细胞上清共培养，中脑神经元的突起明显的缩短；与增强自噬的小胶质细胞上清共培养观察到相反的变化。结论：大自噬可以调控小胶质细胞介导的炎症并且增强自噬观察到小胶质细胞向M2表型趋化，并减弱小胶质细胞条件培养基对中脑损伤元的损伤作用。关键词：大自噬；小胶质细胞；炎症；多巴胺神经元作者：靳萌萌指导教师

8、：刘春风教授胡丽芳副教授II大自噬在小胶质细胞介导的神经炎症及多巴胺神经元损伤中的作用英文摘要Roleofmacroautophagyinregulatingmicroglia-mediatedneuroinflammationanddopaminergicneuroninjuryAbstractObjective:Toinvestigatethepotentialroleofmacroautophagyintheregulationofmicroglia-media