自噬在甲基汞致星形胶质细胞损伤中的作用研究

《自噬在甲基汞致星形胶质细胞损伤中的作用研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号塞!!垒UDC鱼!墨密级公珏编号!Q2里2曼!!!垒QQ!@江。薄大擎硕士学位论文MASTER，SDISSERTATIoN论文题目自噬查里基丞塾星丝膣厦细胞退笾虫的佳且巫究学科专业生理堂作者姓名友亟洼指导教师睦苤挂数援答辩日期2Q!垒生鱼旦!Q目分类号UDC615密级公珏编号10299S1114001硕士学位论文自噬在甲基汞致星形胶质细胞损伤中的作用研究RoLEoFAUToPHAGYINMETHYLMERCURY．INDUCEDNEURoToXICITYINRATPRIMARYASTRofYTES作者姓名：方云涛导师：陆荣柱教授指导

2、教师：王苏华副教授彭婉昕副教授邢光伟高级实验师钱海实验师申请学位：理学硕士学科专业：生理学论文提交日期：2014年4月论文答辩日期：2014年6月学位授予单位：江苏大学答辩委员会主席：陈永昌教授基金资助：国家自然科学基金项目(No．30872139，81273124，31100964)学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权江苏大学可以将本学位论文的全部内容或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫

3、描等复制手段保存和汇编本学位敝。j煳揪保密口，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密耐。学位论文作者签名：君蚕浅指卯竹年‘月矽日独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：君翁爵日期：如f，乒年6月归日江苏大学硕士学位论文摘要目的：甲基汞是一种全球性环境污染物，是无机汞通过微生

4、物和植物的生物转化而生成，人体的主要暴露途径为食用被甲基汞污染的鱼贝类和稻米。甲基汞对人体各组织系统如神经系统、生殖系统、免疫系统等都会产生损害，其最主要靶器官为神经系统，因其脂溶性大，因而可以穿过血脑屏障和胎盘，会造成中枢神经系统不可逆的损伤，影响胎儿的正常发育。目前，甲基汞的毒性机制尚不明确。因此，本实验以原代大鼠星形胶质细胞为研究对象，探索：1．甲基汞对星形胶质细胞的毒性；2．白噬在甲基汞致星形胶质细胞损伤中的作用；3．甲基汞诱导星形胶质细胞的凋亡情况：4．利用抗氧化剂预处理探讨甲基汞可能的毒性机理。最终为明确甲基汞致毒机制，为甲基

5、汞中毒的预防与治疗提供理论基础。方法：1．甲基汞处理原代培养的大鼠星形胶质细胞，通过MTT法检测甲基汞对星形胶质细胞活力的影响，LDH漏出率检测甲基汞的细胞毒性，研究不同浓度(0、1、2、5、10gmol／L)以及不同处理时间(0、3、6、12、24hrs)，甲基汞对星形胶质细胞的影响。2．甲基汞(5}_tmol／L，6hrs)处理星形胶质细胞，经吖啶橙(AO)染色与蛋白免疫印迹实验检测酸性囊泡的形成以及自噬相关蛋白表达，确定细胞自噬的发生。3．不同浓度甲基汞(0、1、5、lOgmol／L)处理星形胶质细胞6小时，用AnnixinVFIT

6、C／PI细胞凋亡检测试剂盒检测甲基汞诱导的星形胶质细胞凋亡率。4．不同浓度甲基汞(0、1、5、10}tmol／L)处理星形胶质细胞6小时，然后采取蛋白印迹法检测甲基汞处理星形胶质细胞细胞中自噬与凋亡相关蛋白表达的剂量一效应关系。5．采用雷帕霉素(rapamycin)诱导细胞自噬和3．甲基腺嘌呤(3．MA)，氯喹(CQ)，At95siRNA基因干扰抑制细胞自噬等实验手段调节细胞自噬水平，随后用MTT法与蛋白印迹法观察调节自噬对甲基汞致星形胶质细胞毒性的影响以及白噬、凋亡相关蛋白表达情况，以及AnnixinVFITC／PI细胞凋亡检测试剂盒检

7、测细胞凋亡，评价自噬的调控对甲基汞诱导的细胞凋亡的影响。6．利用抗氧化剂Ⅳ-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理(5mmol／L，4lars)，MTT法检测甲基汞处理下星形胶质细胞细胞活力的变化来研究抗氧化剂对甲基汞毒性及甲基汞诱导自噬的影响，探讨甲基汞可能的作用机制。自噬在甲基汞致星形胶质细胞损伤中的作用研究结果：1．甲基汞对星形胶质细胞具有细胞毒性，并且呈浓度时间依赖性：2．吖啶橙(AO)染色，蛋白免疫印迹与AnnixinVFITC／PI细胞凋亡试剂盒检测结果显示甲基汞处理星形胶质细胞会显著地诱导细胞自噬与细胞凋亡的发生(P<0．05)，并且

8、随着甲基汞处理浓度的升高，星形胶质细胞细胞凋亡比例也随之上升，具有浓度依赖关系；3．蛋白印迹分析结果显示不同浓度甲基汞处理下，自噬标志性蛋白LC3II的转换，Beclinl，P62／SQSTM