脂多糖介导的胚胎小鼠多巴胺神经元损伤——帕金森病炎症细胞模型的建立

《脂多糖介导的胚胎小鼠多巴胺神经元损伤——帕金森病炎症细胞模型的建立》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、徐州医学院硕士学位论文脂多糖介导的胚胎小鼠多巴胺神经元损伤--帕金森病炎症细胞模型的建立姓名：王进华申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：沈霞2012-04徐州医学院硕士学位论文脂多糖介导的小鼠多巴胺神经元损伤一帕金森病炎症细胞模型的建立中文摘要目的通过观察脂多糖对体外培养胚胎小鼠中脑原代多巴胺神经元及其对上清液中肿瘤坏死因子(TumorNecrosisFactor．Oc，TNF．Q)的影响，拟建立帕金森病小鼠炎症细胞模型。方法将体外培养7天的孕13d的C57／BL小鼠胚胎中脑含有多巴胺神经元的原代混合细胞随机分为对照组及LPS组，并

2、按照LPS的不同浓度，又将LPS组分为0．1mg／L、lmg／L和10mg／L三个亚组，每个亚组又按作用时问分为8h、24h、72h组。采用酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞荧光染色法标记多巴胺神经元，对不同组别TH阳性细胞进行计数并用荧光显微镜观察每组多巴胺神经元的形态变化。分别收集LPS(10mg／1)作用8h、24h、72h组及LPS(0．1、1．和10mg／L)作用72h组的细胞上清液。用ELASA法检测各组上清液中TNF．a表达情况。应用SPSS16．O进行数据分析，各组间TH阳性细胞数及TNF．cL含量比较采用单因素方差分析和SNK

3、—q检验，两组间的比较采用两独立样本的t检验，检验水准a=0．05。结果1．各组TH阳性细胞数及多巴胺神经元形态变化结果：与对照组相比，LPS(O．1mg／1)分别与含有多巴胺神经元的混合细胞共孵育8h、24h、72h时，各组间TH阳性细胞数及其细胞形态无明显差异(P>0．05)，LPS(1mg／L)分别与含有多巴胺神经元的混合细胞共孵育8h、24h、72h，发现在72h时，TH细胞阳性数减少，表现为体积的减小、折光线减弱、细胞突起数目减少、数目不完整，与对照组相比有显著的差异f尸<0．05)，而在8h、24h两个时问点，TH阳性细胞数量

4、及形态无明显变化(尸>0．05)。LPS(10mg／1)分别与含有多巴胺神经元的混合细胞共孵育8h、24h、72h后，在24h时，TH阳性细胞数量减少，与对照组有统计学差异(P<0．05))，表现为体积的减小、折光线减弱、细胞突起数目减少，在72h徐州医学院硕士学位论文时，与对照组相比LPS(O．1mg／L)组、LPS(1mg／L)相比TH阳性细胞数量明显减少(P<0．05)，细胞形态变化显著。2．各组细胞上清液TNF．0【表达结果：LPS(10mg／L)分别作用8h、24h、72h时，TNF—c【的表达量较对照组明显增加(P

5、，24小时TNF．0【最高，72小时TNF．a表达量较24小时降低，但与8小时组相比明显增加(氏0．01)。LPS浓度分别为0．Igm／L、Img／L、10mg／L作用72小时，分别测定各个浓度点的TNF．0【表达量，发现TNF．0【随着浓度的增高表达量增加(火0．01)，且与对照组相比有显著差异(尸<0．01)。结论1．LPS可诱导胚胎小鼠中脑多巴胺神经元的损伤及TNF—a表达的变化，通过LPS可成功建立小鼠帕金森病炎症细胞模型。2．LPS对多巴胺能神经元产生一定的毒性作用，其机制可能与小胶质细胞激活后释放TNF．a有关。关键词帕金森病

6、；多巴胺神经元；脂多糖；肿瘤坏死因子．q；细胞模型；小鼠徐州医学院硕士学位论文———————————————————————————————二—————～一TheinjuryofdopaminergicneuronswereinducedbyLPS·Theestabishedinflammatorycellmodelofparkinson’S■●●nlseaseinmouseAbstractObjectiveToestablishinflammatorycellmodelofP诎inson，sdiseasdinmousebyobserve

7、ingtheeffectsofLPSonembryonicmousemesencephalicdopaminergicneuronsculturesandexpresssionchangeofTNF．0c．Methods1．Mousemesencephalicneuron．gliacellswereobtainedfromtimedpregnantC57／BLmouseonembryonic13d，andallocatedintotwogroups：contr01groupandLPSgroup．Accordtothedifferentc

8、oncentrationofLPS，theLPSgroupweredividedinto0．1mg／L，lmg／Land10mg／Lsubgroups，whichwerecon．culture