mn9d多巴胺能细胞损伤模型的建立基

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1、MN9D多巴胺能细胞损伤模型的建立基作者：钮洪艳张学文刘淮东高殿帅【摘要】目的建立离体多巴胺(dopamin，DA)能神经细胞系MN9D细胞损伤模型。方法离体细胞培养条件下，于培养液中加入不同浓度6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine，6-OHDA)作用于MN9D细胞30min。24h后，MTT比色法检测MN9D细胞的存活率、Hoechst33258核染色和流式细胞仪检测MN9D细胞的凋亡变化。结果6-OHDA以浓度依赖性的方式引起MN9D细胞的凋亡，导致细胞存活率降低。200μmol/

2、L浓度的6-OHDA作用30min、培养24h后，MN9D细胞的存活率降低至68.8%左右，凋亡率增高至约37.8%。结论6-OHDA能够引起MN9D细胞的存活率降低，而凋亡率增高，产生类似帕金森病时的DA能神经细胞损伤的表现。【关键词】多巴胺能神经细胞;6-羟基多巴胺;MN9D细胞;帕金森病　　Abstract:ObjectiveToestablishthecellinjurymodelofdopaminergiccelllineMN9Dinvitro.MethodsMN9Dcellswereex

3、posedtodifferentconcentrationsof6-hydroxydopamine(6-OHDA)for30mininvitro,and24hlater,thesurvivalofMN9DcellswasdetectedwithMTTchromatometry,andtheMN9D12cellsapoptosiswasdeterminedwithHoechst33258stainingandflowcytometry.Results6-OHDAcausedtheapoptosisof

4、MN9Dcellsinaconcentration-dependentmanner:thesurvivalrateofcellsdecreasedapproximatelyto68.8%whiletheapoptoticpercentageofcellsincreasedto37.8%24haftera30minexposureto200μmol/L6-OHDA.Conclusion6-OHDAcouldinduceandecreaseinthesurvivalrateofMN9Dcellsanda

5、nincreaseintheirapoptosispercentage,causinganinjurytoMN9DcellsinvivoinaformsimilartotheinjurymodelofdopaminergicneuronsinParkinson′sdisease(PD).　　Keywords:dopaminergiccells;6-OHDA;MN9Dcells;Parkinson′sdisease　　帕金森病(Parkinson′sdisease,PD)是以中脑黑质致密部(subst

6、antianigraparscompacta,SNc)多巴胺(DA)能神经细胞进行性退变为主要病理特征的神经系统疾病。PD模型是PD基础研究的重要前提。通过大脑立体定位注射神经毒物6-羟基多巴胺(6-OHDA)或腹腔注射甲基苯基四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)是制作PD模型的常用方法。MN9D细胞是一种由胚胎小鼠中脑顶盖的DA能神经细胞和12N18TG2神经母细胞瘤细胞融合而成的细胞系，由于能够表达酪氨酸羟化酶(tyros

7、inehydroxylase,TH)，并且能够合成、释放及吸收DA[1-3]，因而被广泛应用于DA能神经细胞损伤模型的研究，这些细胞也用于PD与DA能神经元丧失有关的机制及治疗的研究[4]。6-OHDA是一种神经毒素，由于其结构与DA类似，常被误作为神经递质摄入到神经元内，通过启动细胞内凋亡途径而选择性引起DA能神经细胞死亡、缺失[5-6]。目前，应用MN9D细胞建立离体条件下DA能神经细胞的损伤模型，经网上搜索国内未见此类研究文献。本研究在离体细胞培养条件下，于培养液中加入不同浓度的6-OHDA作

8、用于MN9D细胞30min，24h后，观察MN9D细胞的存活率、凋亡率及与6-OHDA作用浓度的关系，选择适当的6-OHDA浓度，建立稳定的离体细胞损伤模型，以产生类似于PD细胞内损伤的形式。　　1材料和方法　　1.1MN9D细胞和试剂MN9D细胞由首都医科大学惠赠。DMEM/F12、胎牛血清、6-OHDA、维生素C、MTT、Hoechst33258染色剂和金属离子螯合剂(diethylenetriaminepentaaceticacid,DETAPAC)购自Sigm