小鼠子宫内膜细胞炎症模型的建立_杨倩.pdf

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1、第３４卷第６期河北农业大学学报Ｖｏｌ．３４Ｎｏ．６２０１１年１１月ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＨＥＢＥＩＮｏｖ．２０１１文章编号：１０００－１５７３（２０１１）０６－００８７－０４小鼠子宫内膜细胞炎症模型的建立杨倩，史万玉，赵驻军，钟秀会＊（河北农业大学动物科技学院，河北保定０７１００１）摘要：用０．２５％胰酶－ＥＤＴＡ消化法分离培养小鼠子宫内膜细胞，用细菌脂多糖（ＬＰＳ）诱导子宫内膜细胞炎症，以培养细胞的形态学和传统炎症指标作为炎症发生和发展的判断标准。以不同浓度的ＬＰＳ作用于细胞，收集不同时段的细胞，用ＲＴ－ＰＣＲ的方法测定细胞中ＩＦＮ－γｍ

2、ＲＮＡ的表达丰度。结果表明，１００ｎｇ／ｍＬＬＰＳ是体外培养的子宫内膜细胞诱导炎症的最适浓度。炎症模型组培养细胞中ＩＦＮ－γ的丰度表达极显著于空白组（Ｐ＜０．０１），表明炎症模型建立成功。关键词：子宫内膜细胞；ＬＰＳ；炎症模型中图分类号：Ｓ８５２．１文献标志码：ＡＩｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｍｏｄｅｌｏｆｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｃｅｌｌｓｉｎｍｉｃｅＹＡＮＧＱｉａｎ，ＳＨＩＷａｎ－ｙｕ，ＺＨＡＯＺｈｕ－ｊｕｎ，ＺＨＯＮＧＸｉｕ－ｈｕｉ（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＨｅｂｅｉ，Ｂａｏｄｉｎｇ０７１００

3、１）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｐｒｉｍａｒｙｃｕｌｔｕｒｅｄｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｃｅｌｌｓｉｎｍｉｃｅｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄａｎｄｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙｔｒｙｐｓｏ－ｇｅｎ－ＥＤＴＡｄｉｇｅｓｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ，ｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｉｎｄｕｃｅｄｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｂｙｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａ－ｒｉｄｅ（ＬＰＳ）．Ｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙａｎｄｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓｏｆｔｈｅｃｅｌｌｓｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄａｓｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｃｒｉｔｅｒｉａｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｃｅｌｌｓｗｅｒｅｔｒｅａｔ

4、ｅｄｗｉｔｈｇｒａｄｅｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆＬＰＳ．Ｔｈｅｃｅｌｌｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｅｒｉｏｄｓ，ａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆＩＦＮ－γｍＲＮＡｗｅｒｅｄｅ－ｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＲＴ－ＰＣＲ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ１００ｎｇ／ｍＬＬＰＳｗａｓｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎｉｎｄｕｃｉｎｇｔｈｅｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｏｆｃｕｌｔｕｒｅｄｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｃｅｌｌｓ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＩＦＮ－γｉｎｔｈｅｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃ

5、ａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｃｏｎｔｒｏｌａｔｔｈｅｓａｍｅｐｅｒｉｏｄ（Ｐ＜０．０１），ｔｈｅｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｍｏｄｅｌｏｆｔｈｅｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｃｅｌｌｓｗａｓｃｒｅａｔｅｄｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｃｅｌｌ；ＬＰＳ；ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｍｏｄｅｌ为了加快繁殖优良品种，以体外受精－胚胎移研究方法和水平大多以观察疗效为主，显然不够深植为代表的辅助生殖技术，得到大力发展。尽管已入。本试验通过小鼠子宫内膜细胞的分离、培养，解决了受精问题，胚胎质量也得到了明显的提高，但ＬＰＳ来模拟子宫内膜炎症模型，采用ＲＴ－ＰＣＲ

6、方法容受胎儿的子宫的问题使得胚胎种植率和临床妊娠检测在ＬＰＳ作用后不同时期细胞内ＩＦＮ－γｍＲＮＡ率并无显著上升，其中以子宫内膜炎症是临床上常丰度的变化，以期建立小鼠的体外培养子宫内膜炎见的导致流产和不孕的原因之一，也给生产带来巨症模型。［１－２］大损失。从防治奶牛子宫内膜炎的资料看，其＊收稿日期：２０１１－０５－０７基金项目：国家自然科学基金（３０９７２２０８）和教育部博士点基金（２０１０１３０２１１０００４）资助．作者简介：杨倩（１９８４－），女，河北保定市人，在读研究生．通讯作者：钟秀会（１９５６－），男，教授，博导，研究方向：中药药理．Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｘｈ８０７８＠１６３．ｃ

7、ｏｍ．８８河北农业大学学报第３４卷１．３．４ＲＴ－ＰＣＲ法检测细胞中ＩＦＮ－γｍＲＮＡ的表１材料与方法达丰度总ＲＮＡ的提取，按总ＲＮＡ提取试剂盒操１．１试验动物作，用紫外分光光度计测定ＲＮＡ的ＯＤ２６０，ＯＤ２８０１０周龄清洁级未经产昆明小鼠，购于河北省实值，计算ＯＤ２６０／ＯＤ２８０值，判定ＲＮＡ纯度及浓度；取验动物中心。部分ＲＮＡ甲醛变性琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观１．２主要试剂察，以确定其完整性。ＩＦＮ－γ基因上游引物：５－：ＬＰＳＳｉｇｍａ；ＤＭＥＭ