子宫内膜上皮细胞与小鼠胚胎共培养对小鼠胚胎早期发育的影响

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时间:2018-11-29

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1、子宫内膜上皮细胞与小鼠胚胎共培养对小鼠胚胎早期发育的影响 [摘要]  目的:采用子宫内膜上皮细胞与小鼠胚胎共培养,观察其对早期胚胎体外发育的影响。方法:对小鼠子宫内膜上皮细胞进行分离、培养鉴定,然后与体外受精的小鼠胚胎进行共培养,观察共培养对小鼠胚胎卵裂率、孵化率以及囊胚期胚胎总细胞数的影响。结果:与无上皮细胞相比,共培养明显促进了小鼠桑椹胚率(71.3%和61.2%,P<0.05),囊胚率(50.0%和39.7%,P<0.05),囊胚孵化率(34.8%和24.3%,P<0.05)和胚胎总细胞数(44.1和35.6,P<

2、0.05)。结论:子宫内膜上皮细胞能够促进小鼠胚胎的体外发育,对早期胚胎的体外发育环境具有优化作用。  [关键词]  子宫内膜上皮细胞;共培养;体外受精;小鼠  EffectsofCocultureofMouseEmbryoetrialEpithelialCellsonEarlyMouseEmbryonicDevelopment    Abstract:ObjectiveToobservetheeffectsofcocultureofmouseembryoetrialepithelialcellsonearlyembryonicdevelopm

3、entinvitro.MethodsMouseendometrialepithelialcellsouseembryosfertilizedinvitro.Thepercentageofembryocleavage,blastocysthatchingandtotalcellnumberofblastocystetrialepithelialcellscouldpromotetheformationofmousemorula(71.3%and61.2%,P<0.05)andblastocyst(50.0%and39.7%,P<0.0

4、5),andincreasetheblastocysthatchedrate(34.8%and24.3%,P<0.05)andtotalcellnumberofblastocyst(44.1and35.6,P<0.05).ConclusionCocultureetrialepithelialcellscanfacilitatethedevelopmentofearlymouseembryoinvitro,izetheconditionofembryonicdevelopmentinvitro.  Keyetrialepithelia

5、lcells;Coculture;Invitrofertilization;Mouse  早期胚胎发育是一个极其复杂的过程,受到多种因素的影响。在生殖医学等多个领域,胚胎体外培养技术已得到很大的提高,胚胎与体细胞共培养因其能够克服体外发育阻滞、提高移植后胚胎着床率[1]等优势而成为一种有效的胚胎体外培养途径。共培养的方法很多,其中以采用雌性生殖道细胞的效果最佳[2,3]。为进一步研究体细胞对胚胎体外发育环境的影响,本实验采用小鼠子宫内膜上皮细胞和早期胚胎进行共培养,观察其对小鼠胚胎卵裂率、孵化率以及囊胚期胚胎总细胞数的影响。  1  材料与方法

6、  1.1  材料  1.1.1  实验动物:15只20g的昆明雌性小鼠购于中国科学院遗传与发育所实验动物中心。实验动物房光、暗周期均为12h,饲养温度为24℃~26℃,自由采食饮水。  1.1.2  试剂:DMEM培养基(Gibco公司);胎牛血清(FBS,杭州四季青公司);孕马血清促性腺激素(PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(HCG)(宁波激素制品厂);兔抗人角蛋白多克隆抗体(Novocastra公司);生物素标记的羊抗兔IgG和辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(Zymed公司);实验中其余所用化学药品和试剂购自Sigma公司。  1.2  方

7、法  1.2.1  小鼠子宫内膜上皮细胞的分离培养:根据[5],体外受精方法参见王敏康[6]等人的报道。受精后体外培养24h,均等卵裂为2-细胞者判定为受精卵。冷冻细胞复苏后接种于96孔培养板,体外培养3d。共培养前用含0.4%BSA的mKSOM培养基润洗细胞两次,加入新鲜mKSOM培养基。在无上皮细胞单层的培养孔中也同样加入新鲜mKSOM培养基作为对照组,培养板置于CO2培养箱预热3h。受精卵随机放入对照组和实验组的各培养孔中,每孔放入胚胎20~30个。置入37℃、5%CO2的培养箱中培养,每24小时更换新鲜培养基,每日观察记录胚胎的发育情况

8、。  1.2.4  囊胚期胚胎细胞计数:囊胚期的胚胎用含1%多聚甲醛室温下固定5min,固定好的胚胎移入Hoechst33342染色液滴中,室温孵育5

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