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时间:2018-08-01
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1、子宫内膜上皮细胞与小鼠胚胎共培养对小鼠胚胎早期发育的影响 [摘要] 目的:采用子宫内膜上皮细胞与小鼠胚胎共培养,观察其对早期胚胎体外发育的影响。方法:对小鼠子宫内膜上皮细胞进行分离、培养鉴定,然后与体外受精的小鼠胚胎进行共培养,观察共培养对小鼠胚胎卵裂率、孵化率以及囊胚期胚胎总细胞数的影响。结果:与无上皮细胞相比,共培养明显促进了小鼠桑椹胚率(71.3%和61.2%,P<0.05),囊胚率(50.0%和39.7%,P<0.05),囊胚孵化率(34.8%和24.3%,P<0.05)和胚胎总细胞数(44.1和35.6,P<
2、0.05)。结论:子宫内膜上皮细胞能够促进小鼠胚胎的体外发育,对早期胚胎的体外发育环境具有优化作用。 [关键词] 子宫内膜上皮细胞;共培养;体外受精;小鼠 EffectsofCocultureofMouseEmbryowithEndometrialEpithelialCellsonEarlyMouseEmbryonicDevelopment Abstract:ObjectiveToobservetheeffectsofcocultureofmouseembryowithendometrialepithelialcellsonearl
3、yembryonicdevelopmentinvitro.MethodsMouseendometrialepithelialcellswereisolatedandcultured,thenitwascoculturedwithmouseembryosfertilizedinvitro.The10percentageofembryocleavage,blastocysthatchingandtotalcellnumberofblastocystwereobserved.ResultsCoculturewithendometrialepithel
4、ialcellscouldpromotetheformationofmousemorula(71.3%and61.2%,P<0.05)andblastocyst(50.0%and39.7%,P<0.05),andincreasetheblastocysthatchedrate(34.8%and24.3%,P<0.05)andtotalcellnumberofblastocyst(44.1and35.6,P<0.05).ConclusionCoculturewithendometrialepithelialcellscan
5、facilitatethedevelopmentofearlymouseembryoinvitro,whichcanoptimizetheconditionofembryonicdevelopmentinvitro. Keyword:Endometrialepithelialcells;Coculture;Invitrofertilization;Mouse 早期胚胎发育是一个极其复杂的过程,受到多种因素的影响。在生殖医学等多个领域,胚胎体外培养技术已得到很大的提高,胚胎与体细胞共培养因其能够克服体外发育阻滞、提高移植后胚胎着床率[1]等优
6、势而成为一种有效的胚胎体外培养途径。共培养的方法很多,其中以采用雌性生殖道细胞的效果最佳[2,3]。为进一步研究体细胞对胚胎体外发育环境的影响,本实验采用小鼠子宫内膜上皮细胞和早期胚胎进行共培养,观察其对小鼠胚胎卵裂率、孵化率以及囊胚期胚胎总细胞数的影响。10 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 实验动物:15只20g的昆明雌性小鼠购于中国科学院遗传与发育所实验动物中心。实验动物房光、暗周期均为12h,饲养温度为24℃~26℃,自由采食饮水。 1.1.2 试剂:DMEM培养基(Gibco公司);胎牛血清(FBS,杭州四季青
7、公司);孕马血清促性腺激素(PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(HCG)(宁波激素制品厂);兔抗人角蛋白多克隆抗体(Novocastra公司);生物素标记的羊抗兔IgG和辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(Zymed公司);实验中其余所用化学药品和试剂购自Sigma公司。 1.2 方法 1.2.1 小鼠子宫内膜上皮细胞的分离培养:根据Wegner[4]等人报道的方法从小鼠子宫组织中分离上皮细胞。调整细胞密度为5×105/ml,细胞以0.5ml/孔接种于24孔培养板中,置入37℃、95%湿度、5%CO2培养箱中培养。次日下午每孔更换0.510ml
8、新鲜培养液,以后隔天换液一次。在接种后第5~6天,细胞完全生长汇合时,收集细胞进行冷冻保存。 1.2.2 细胞的免疫染色:复苏的上皮细胞直接接种于
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