染料木黄酮对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用论文

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1、染料木黄酮对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用论文杨延东高全桂陈文芳【摘要】目的探讨染料木黄酮对1甲基4苯基1,2,3,6四氢吡啶（MPTP）制备的帕金森病（PD）模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用。方法将C57BL6雄性小鼠随机分为正常对照组、MPTP模型组及染料木黄酮预处理组。用逆转录聚合酶链式反应（RTPCR）技术检测黑质酪氨酸羟化酶（TH）及多巴胺转运体(DAT)基因的表达水平。应用高效液相色谱法检测纹状体（Str）内DA及其代谢物二羟基苯乙酸（DOPAC）含量。结果MPTP模型组黑质TH和DAT基因的表达较正常对照组明显降低，染料木黄酮预处理组可逆转上述改

2、变（F=20.31、13.19,P0.01)。MPTP模型组Str内DA及其代谢产物DOPAC的含量较对照组明显减少，应用染料木黄酮后可逆转上述改变(F=63.58、16.12,P0.01)。结论染料木黄酮对MPTP制备的PD模型小鼠黑质纹状体DA能神经元有明显的保护作用。【关键词】帕金森病染料木黄酮1甲基4苯基1236四氢吡啶黑质纹状体［ABSTRACT］ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectofgenisteinondoparminergicneurons.MethodsC57BL6micelydividedintothreegroup

3、s:controlgroup(DMSO,ip),MPTPgroup(15mg/kg,ip)andgenisteinpretreatment(10mg/kg,ip)group.Thechangesoftyrosinehydroxylase(TH)anddopaminetransport(DAT)geneexpressioninsubstantianigra(SN)erasechainreaction(RTPCR).ThecontentsofDAanditsmetabolitesdihydroxyphenylaceticacid(DOPAC)inedbyhighperformanc

4、eliquidchromatographyelectricalchemicaldetection(HPLCECD).ResultsGenisteinpretreatmentcouldpreventtheMPTPinduceddecreaseofTHandDATgeneexpression(F=20.31,13.19;P0.01).MPTPsignificantlydecreasedthelevelsofdopamine(DA)anditsmetabolitesdihydroxyphenylaceticacid(DOPAC)inthestriatum,ent(F=63.58,16

5、.12;P0.01).ConclusionGenisteinhasneuroprotectiveeffectsondopaminergicneuronsagainstMPTPinducedmousemodelofPD.［KEYEGA公司产品；TagDNA聚合酶为TAKARA公司产品。1.2实验动物造模与给药实验动物随机分为正常对照组、MPTP模型组和染料木黄酮预处理组，每组6只。3组动物每天8：00时先行腹腔注射二甲基亚砜（DMSO)或染料木黄酮(10mg/kg)，连续3d；MPTP模型组于第4天注射DMSO后2h开始腹腔注射MPTP(15mg/kg)，连续注射4次，每次间隔2h，

6、自第5天开始继续腹腔注射DMSO，连续4d；染料木黄酮预处理组于第4天注射染料木黄酮后2h开始腹腔注射MPTP(15mg/kg)，连续注射4次，每次间隔2h，自第5天开始继续腹腔注射染料木黄酮，连续4d。1.3RTPCR检测末次注射24h后断头取脑，快速取双侧SN，加TRIzol试剂提取总RNA。总RNA经紫外线分光光度计定量后,参照试剂盒说明书建立20μLRT反应体系：取3μg总RNA加5mmol/LMgCl24μL、10×逆转录反应缓冲液2μL，1mmol/LdNTP各2μL，AMV逆转录酶15U0.5μL，RNaseInhibitor0.5μL，Olig（dT）15引物1μL

7、，加无RNase水至20μL，42℃反应1h，99℃加热5min，然后快速冷却到4℃。反转录得到的cDNA用作PCR反应模板，或暂放-20℃保存。建立25μLPCR反应体系：在3μgRT产物中加入25mmol/LMgCl21.5μL，10×逆转录反应缓冲液2.5μL，dNTP各2μL,上下游引物各1μL，TaqDNA聚合酶0.2μL，加无RNase水至25μL。TH基因上游引物序列：5′AAAATCCACCACTTAGAGACC3′，下游引物序列：5′