多重信号放大策略用于循环microrna的检测研究

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1、葦掠化与１０５３２学号Ｓ１３１１Ｗ２００３分类号密级Ｘ巧Ｘ满＾炎麥ＨＵＮＡＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ工程硕±学位论文多重信号放大策略用于循环ｍｉｃｒｏＲＮＡ的检测研究学位申请人姓名：郭晓辰培养单位：化学化丄学院导师姓名及职称：羊小海教授秦迪试高级工程师Ｉ学科专业：制药工程研究方向：纳米尺度及分子水平上的生化分析论文提交日期：２０１５年０５月２５日学校代号：１０５３２学号：Ｓ１３１１Ｗ２００３密级：湖南大学工程硕±学位论文

2、多重信号放大策略用于循环ｍｉｃｒｏＲＮＡ的检测硏究：郁晓辰学位申请人姓名导师姓名及职称：羊小海教授秦迪就窩级工程师培养单位：化学化工学院专业名称；制药工程论文提交日期：２０１５年０５月２５日论文答辩日期：２０１５年０６月０３日：陈念华教授答辩委员会主席ＲｅａｓｅｒｃｈｏｆｍｕｌｔｉｌｅｓｉｇｎａｌａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｔｒａｔｅｇｉｅｓｉｎｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｐｏｆｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇｍｉｃｒｏＲＮＡｂｙＧＵＯＸ

3、ｉａｏｃｈｅｎＢ．Ｓ．（Ｚｈｏｎｇｙｕａ打ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈ打ｏｌｏｇｙ）２０１３Ａｔｈｅｓｉｓｓｕｂｍｉｔｔｅｄｉ打ａｒｔｉａｌｓａｔｉｓｆａｃｔｉｏ打ｏｆｔｈｅｐＲｅｑｕｉｒｅｉｎｅ打ｔｓｆｏｒ化ｅｄｅｒｅｅｏｆｇＭａｓｔｅｒｏｆＥｎｉｎｅｅｒｉｎｇｇｉｎＰｈａｒｎｉａｃｅｕｔｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｉ打ｔｈｅＧｒａｄｕａｔｅＳｃｈｏｏｌｏｆＨｉｍ泣打ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＳｕｅｒｖｉｓｏｒｓｐＰｒｏｆｅｓ

4、ｓｏｒＹＡＮＧＸｉａｏｈａｉＳｅｎｉｏｒｅ打ｇｉｎｅｅｒＦＮＤｉｌａｎＱＪｕｎｅ２０１５额巧大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研巧所。取得的研巧成果除了文中特别加Ｗ标注引用的內容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡。献的个人和集体，均已在文中明确方式标明本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。＾作者签名：Ｉ？贿日期；ＷＩ年＜月Ｊ日ｆ学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了

5、解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权湖南大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于１、保密□，在年解密后适用本授权书。２、不保密囚。＂＂请在上相应方框内打ａ／（）王作者签名１：日期；＾主年＜月日＇：？导师签名Ａ秦错＾１主年＾月主日夺Ｉ多重信号放大策巧用于循环ｍｉｃｒｏＲＮＡ的检测研巧摘

6、要ｍ一ｉｃｒｏＲＮＡ是目、循环前个相当活跃的研究领域，它对于探索生命现象疾病发生机制、疾病诊断与预后、基因治疗、药物开发等方面都具有重大意义。然而传统的循环ｍｉｃｒｏＲＮＡ检测技术大多操作复杂且受灵敏度等方面的限制，往往不能满足考察循环ｍｉｃｒｏＲＮＡ生物功能的需要。、环糊精聚合物不仅保持了环糊精的包络识别能力，且具有稳定性增强溶解度增大－环糊精聚、交联剂效应及多价结合效应等优点，我们在前期研究中发现Ｐ合物对巧有较强的巧光増强作用，可与其它检测技术结合从而提高分析方法的灵敏度－环糊精聚合物

7、对巧的巧光增强作用并结合工具酶的优。基于此，本文基于Ｐ点，发展了快速简便的高灵敏分析方法用于循环ｍｉｃｒｏＲＮＡ的检测，具体内容如下：－１．基于Ｐ环糊精聚合物对巧的巧光増强效果，设计了ＷＤＮＡ聚合酶与Ｌ１１ａｍｂｄａ核酸外切酶为工具酶、３端标巧且５端磯酸化的分子信标为报告探针，实ｃｒｏＲＮＡ－２现了ｍｉ１的高灵敏检测。在目标ｍｉｃｒｏＲＮＡ存在时，该体系依次发生两步反应：（ｌ）ＤＮＡ聚合酶辅助的等温链置换放大反应；（２）Ｌａｍｂｄａ核酸外切酶辅助的循环酶切放大反应。两步反应的结果生成大

8、量位于单核巧酸上的巧，并嵌－入Ｐ环糊精聚合物的空腔内，引起巧光信号的显著増强。反之，在没有目标ｍ－ｉｃｒｏＲＮＡ存在时，位于分子信标上的巧由于大的空间位阻难Ｗ嵌入Ｐ环糊精聚合物空腔内，因而焚光信号很弱。本方法中的分子信标不需要浑灭基团的参与，选择性和灵敏度均较好，对ｍｉｃｒｏＲＮＡ的检测限为０．３Ｍ。