microrna研究策略 microrna转化 医学研究与sci论文策略

《microrna研究策略 microrna转化 医学研究与sci论文策略》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、MicroRNA研究策略赢润生物2012年07月26日讲座主线MicroRNA简介MicroRNA的检测MicroRNA的过表达如何下调MicroRNAMicroRNA靶基因验证实验MicroRNA相关SCI论文实例http://www.yrbio.com一.MicroRNA简介MicroRNA（miRNA）是一类内生的、长度约20-24个核苷酸的小RNA。其在细胞内具有多种重要的调节作用。网状作用模式：每个miRNA可以有多个靶基因，而几个miRNAs也可以调节同一个基因。据推测，miRNA调节着人类三分之一的基因。miRNA数

2、据库：www.mirbase.orghttp://www.yrbio.comhttp://www.yrbio.com两个概念：pri-miRNApre-miRNAMaturemiRNAmiRNA的种子序列（seedsequence）：成熟miRNA的5’端的第2～8位核苷酸与靶mRNA3’端的非翻译区（UTR）部分序列的结合很重要，被称为种子序列。http://www.yrbio.com二.MicroRNA的检测MicroRNA芯片优点：高通量缺点：成本高；难区分前体miRNA和成熟miRNANorthernblot优点：能比

3、较直观的反映miRNA的表达量高低缺点：步骤复杂；难区分前体miRNA和成熟miRNAhttp://www.yrbio.commiRNAqPCR检测（Real-timePCR）优点：可区分前体miRNA和成熟miRNA；检测灵敏度高；高特异性；成本较低难点：MaturemiRNA很短，如何检测？解决方法：加长序列http://www.yrbio.commiRNAqPCR检测：Stem-loop法http://www.yrbio.commiRNAqPCR检测：PolyA加尾法http://www.yrbio.comStem-loop

4、法优点：特异性高缺点：每做一次RT，只能检测一个miRNA代表厂家：ABI、AmbionPolyA加尾法优点：通用性高；一次RT可以检测多个miRNA缺点：特异性稍差代表厂家：Qiagenhttp://www.yrbio.comYRBIOTMmiRNAqPCRDetectionKithttp://www.yrbio.com相关实验数据：良好的熔解曲线http://www.yrbio.commiRNAqPCR检测实例http://www.yrbio.commiRNAqPCR检测实例http://www.yrbio.com三.Micr

5、oRNA的过表达pri-miRNApre-miRNAMaturemiRNA载体形式载体形式化学合成：mimicsCMV启动子~600bp转染效率高可长期表达可带荧光U6/H1启动子70~600bp可带荧光可长期表达转染效率高miRNA成熟序列价格较高价格较高可进行各种修饰可带荧光作用时间短转染效率有时较低价格较低http://www.yrbio.compri-miRNA结构：CMVp---EGFP---pri-miRNA---PolyApre-miRNA结构：hU6p---pre-miRNA---TTTTTT人工pri-miR

6、NA结构：CMVp---EGFP---mir30左臂---pre-miRNA---mir30右臂---PolyAhttp://www.yrbio.compYr-pri-miRNA范例http://www.yrbio.compYr-pri-miRNA范例http://www.yrbio.compYr-pri-miRNA范例http://www.yrbio.compYr-pri-miRNA范例http://www.yrbio.compYr-pri-miRNA范例http://www.yrbio.compYr-pri-miRNA范例ht

7、tp://www.yrbio.com人工pri-miRNA范例http://www.yrbio.comTips：pri-miRNA过表达，miRNA能够提升多少？（1）如果目的细胞中已有miRNA的高表达：大约提升2~5倍。（2）如果目的细胞中目的miRNA低表达或无表达：大约能提升50~1000倍。http://www.yrbio.com四.如何下调MicroRNA如何下调miRNA，实现loss-of-function研究？（1）化学合成的miRNAantisensoligo。优点：比较经济；合成时间较短缺点：作用时间短；转染

8、效率受限制http://www.yrbio.com（2）载体形式的miRNAinhibitor。优点：可长期稳定作用；转染效率高缺点：构建周期较长http://www.yrbio.com如何构建载体形式的miRNAinhibitor方法一：miRN