microrna与肿瘤机制—医学课件

《microrna与肿瘤机制—医学课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、Effectsoflet-7microRNAonCellGrowthandDifferentiationofPapillaryThyroidCancerLiJianfang2010-10-27microRNA定义1993年，Ambros首先在Cell杂志上撰文发现了一段非编码的单链小分子RNA，具有调节发育时相的作用，这是对microRNA的首次报道。近年来，Cell/Nature/Scicence连续把RNA的研究进展列为“十大科技突破之一”，其中最引人注目的是microRNA。microRNA定义microRNA：一类18-24

2、个核苷酸的非编码的小RNA分子，由发夹结构单链RNA前体经过Dicer酶加工而成。不同于siRNA（双链）但是和siRNA密切相关。据推测，这些非编码小分子RNA（miRNAs）参与调控基因表达，但其机制区别于siRNA介导的mRNA降解。miRNAs的表达方式各不相同，具有分化的位相性和时序性：在不同组织、不同发育阶段中miRNA的水平有显著差异。DevelopmentofmicroRNAmiRNA的功能对一部分miRNAs的研究分析提示：miRNAs参与生命过程中一系列的重要进程，包括早期发育(Reinhart2000)，细胞增

3、殖，细胞凋亡，细胞死亡(Brennecke2003），脂肪代谢（Xu2003)和细胞分化(Kawasaki2003)。此外，一个研究表明，2个miRNAs水平的下降和慢性淋巴细胞白血病之间的显著相关，提示miRNAs和癌症之间可能有潜在的关系(Calin2002)。然而，大多数miRNAs的功能仍然是个谜。miRNA的作用方式最早被发现的两个miRNAs——lin-4andlet-7被认为是通过不完全互补结合到目标靶mRNA3’非编码区端，以一种未知方式诱发蛋白质翻译抑制，进而抑制蛋白质合成，阻断mRNA的翻译。多个果蝇miRNAs

4、也被发现和他们的目标靶mRNAs的3’非编码区有部分同源。由于miRNAs和其潜在的目标靶之间并非完全互补，这使得通过信息学的方法鉴定miRNA的目标靶位点变得困难。因而也无法确定miRNAs的作用方式是什么，以何种机制影响mRNA的翻译，以何种方式调控基因表达。miRNAs的作用目标靶和活性机制一直是各地的研究人员的关注热点。研究miRNA的新工具小分子RNA的分离：现行的RNA纯化方法包括有机溶剂抽提+乙醇沉淀，或者是采用硅胶膜离心柱的方法来纯化RNA。小分子RNA往往被淘汰掉，因而不适用于小分子RNA。miRNAIsolati

5、onKit主要是采用玻璃纤维滤膜离心柱(glassfiberfilter，GFF)方法分离。小分子RNA探针的制备：要准备目的基因的一小段寡核苷酸序列，3’端另外增加8个和T7启动子互补的碱基，将这段寡核苷酸和T7启动子引物退火，用Klenow大片断补齐得到双链的转录模版，然后用T7RNA聚合酶、rNTP和标记物混合，体外转录得到标记的小分子RNA探针。研究miRNA的新工具小分子RNA的检测：   由于小分子RNA是一类很小的分子，部分小分子RNA表达水平可能很低，因而需要极为灵敏而定量的分析工具，由于其分子很小，用RT-PCR

6、的方法来定量研究非常困难。目前多数采用NorthernBlots——一种技术复杂而费力的方法。改进的新方法：将同位素标记好的小分子RNA探针和待检测样品混合杂交，未杂交的RNA和多余的探针用单链核酸酶消化，然后使核酸酶失活，并纯化杂交的RNA分子，最后通过变性胶电泳放射自显影检测结果。IntroductionPapillarythyroidcarcinoma(PTC)isthemostprevalentendocrinemalignancyinhumans[12].70%ofPTCsharborgeneticalterationsi

7、nRET,RAS,orBRAF，andlinearsignalingalongtheRET-RAS-BRAF-ERKpathwayiskeytotheirdevelopment[13,14].Inparticular,RETgenerearrangementsoccurinupto43%ofPTCs[15].IntroductionInthisstudy：thepotentialinvolvementoflet-7miRNAinPTCdevelopmentisinvestigated.Becauselet-7wasdemonstra

8、tedtoinhibitRASexpression,itmightprovideatumorsuppressorfunctioninthyroidcancerswithMAPKactivation.Ourdatasuggestthat