microRNA研究指南

《microRNA研究指南》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、地址：北京市海淀区中关村南大街乙12号天作国际中心2号楼811室电话：010-62197470/82168662www.genoson.cominfo@genoson.com吉奥生物：YourIdeas,WeDeliver--ATotalSolutionCompanyMicroRNA研究指南1.总RNA提取纯化(TotalRNAPurification)2.microRNA测序（Sequencing）3.microRNA芯片：microRNA表达全景分析(Array)4.microRNA表达确认(Confirmation)5.mic

2、roRNA分布(Localization)6.microRNA功能研究(FunctionalResearch)注：该指南将帮助广大科研工作者认识microRNA以及如何开展microRNA相关实验。以microRNA研究中，最常见的实验设计的前后顺序为例，您可以根据实验的要求进行相应的调整，并从正文中选择所需的实验试剂和服务。制定日期：2010年01月08日microRNA（miRNA,微RNA）：MicroRNAs(miRNAs)是一种广泛存在于动植物内的内源性非编码RNA，在基因调节中起着重要作用，在许多生命和疾病发生过程中也发

3、挥着重要作用。miRNAs产生过程的第一步：在RNA聚合酶Ⅱ介导下转录生成一条长的原始miRNA分子，称为pri-miRNAs。此前体物在细胞核中被所谓的微处理器切割，这种微处理器由RNA聚合酶III的主要成分Drosha和双链RNA结合蛋白即称为DGCR8/Pasha的辅助因子组成，在其剪接下形成长约70nt的具有茎环结构的中间体，称为前体miRNA(pre-miRNAs)。随后pre-RNA由核内转移到胞质，RNA聚合酶III的核酸内切酶Dicer将其剪切产生约为22个核苷酸长度的miRNA:miRNA双链。接下来miRNA的装

4、载过程为miRNA:miRNA双链展开，成熟的miRNA结合于Argonaute(Ago)蛋白。大多数的情况下，miRNA被降解，而miRNA/Ago则形成miRNP复合物的核心成分，介导miRNA的功能发挥。miRNA下调基因表达发生在转录后水平。miRNP复合物与特异的mRNA通过碱基配对相互作用，其二者的结合位点在mRNA的3’端非翻译区，他们的Ago结合蛋白就沉积在mRNA靶点处。miRNA通过去稳定作用或者核内裂解mRNA介导翻译阻抑，这种阻抑作用依赖于miRNA与靶mRNA之间的互补性。miRNA确切的分子功能也依赖于A

5、go蛋白动员。如果与Ago2蛋白结合的成熟miRNA，与靶mRNA完全互补结合，则引起靶mRNA的降解(在植物中比较常见)。mRNA裂解片段通过细胞旁路被清除，而剩下完整的miRNA。靶mRNA的分裂是miRNA调节的优化机制),动物miRNAs有减退靶蛋白水平的趋势而无核内裂解mRNA。另外，成熟的miRNA与只有部分互补序列的靶mRNA结合，随后的翻译抑制可能发生在起始、延长或终止阶段，但是详细机制仍待阐明。由于完全互补的靶结合能力不同，每个miRNA可以结合于多种不同的靶基因发挥不同的功能，从而调节多种编码基因。详细的miRN

6、A靶点预测仍然是一个挑战，但是已有许多生物信息手段应用于成熟miRNA序列的前2-8个核苷酸即所谓的“miRNA种子”来进行预测。目前，Vasudevan等人指出，多种miRNAs不仅能抑制翻译，而且也能增强翻译，是抑制还是增强翻译依赖于细胞周期所处状态。microRNA种类多，目前发现的microRNA都可以在SangermiRBase数据库找到（http://www.mirbase.org/）。正因为microRNA在生物体内发挥的重要调控机制，研究microRNA的表达谱成为目前科研和临床工作的一个热点。吉奥生物——生物医学研

7、究最佳助手www.genoson.com010-6219747021.总RNA提取纯化(TotalRNAPurification)作为microRNA研究的第一步，如何得到高质量的microRNA，将对后续实验的成功与否起着重要的作用。产品推荐：加拿大NorgenBiotek公司：不用酚和氯仿，平价高质的绿色产品：°TotalRNA纯化试剂盒（货号：17200）°动物组织TotalRNA纯化试剂盒（货号：25700）°microRNA纯化试剂盒（货号：21300）NorgenBiotek采用的柱子填充物是一种新型的，并有专利保护的非

8、硅材料。可以在没有酚等有害有机溶剂存在的情况下，纯化包括microRNA在内的所有RNA,而且其纯化回收效率高达99%。人们一直认为如果要纯化microRNA,必须要用Trizol，而不是离心法。这种论断已经过时。NorgenBiot