循环microrna用于低氧性肺动脉高压早期诊断的实验研究

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1、分类号：密级：公开学号：2012409069单位代码：10759石河子大学硕硕硕士士士士学学学学位位位位论论论论文文文文循环microRNA用于低氧性肺动脉高压早期诊断的实验研究学位申请人徐娇阳徐娇阳徐娇阳指导教师余伍忠余伍忠余伍忠教授教授教授教授桂俊豪桂俊豪桂俊豪桂俊豪副副副副教授教授教授教授申请学位类别临床医学硕士临床医学硕士临床医学硕士临床医学硕士专业名称临床检验诊断学临床检验诊断学研究领域临床分子生物学诊断临床分子生物学诊断临床分子生物学诊断临床分子生物学诊断所在学院医学院医学院医学院中国·新疆·石河子2015年6月

2、ResearchontheEarlyDiagnosisofHypoxicPulmonaryHypertensionbyCirculatingMicroRNAADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineByXuJiaoYang(LaboratoryMedicine)DissertationSupervisor:YuWuZhongJune,2015课题来源课题

3、来源课题来源新疆自治区自然科学基金资助项目新疆自治区自然科学基金资助项目（新疆自治区自然科学基金资助项目（（（2015211C2332015211C2332015211C233）2015211C233）））兰州军区医药卫生科研计划课题（兰州军区医药卫生科研计划课题（CLZ12JA12兰州军区医药卫生科研计划课题（CLZ12JA12CLZ12JA12）CLZ12JA12）））摘要摘要摘要研究目的研究目的：研究目的：：：模拟6,000米海拔低压低氧条件，建立低压低氧诱发肺动脉高压（HPH）的大鼠模型，研究低压低氧暴露条件下HPH

4、模型大鼠循环miRNA表达谱特征及其与HPH病理变化的相关性，探索循环miRNA作为HPH诊断生物标志物的可行性。研究方法：1．随机将120只雄性6周龄SD大鼠分为低氧4d、7d、10d、14d和21d暴露组及各应时点对照组，置人工气候舱常规饲养，继以模拟6,000m海拔进行低压低氧暴露，按分组时点定时采用直接测压法检测平均肺动脉压（mPAP）并采集血液及组织标本，心肺组织标本经固定、包埋后进行HE染色及病理分析。2．依据低压低氧后mPAP的变化，取低氧14d暴露组及对照组大鼠血清标本，利用基因芯片技术进行循环miRNA表达

5、谱检测，不同组别间循环miRNA表达谱差异分析采用聚类分析。3．利用荧光定量PCR技术对候选循环miRNA进行验证，采用相对定量法进行数据分析。研究结果：1.低压低氧条件暴露10d、14d、21d的SD大鼠mPAP、右心室肥厚指数（RVHI）及肺小动脉血管壁厚占外径比值（MT%）较同时点对照组显著升高（P＜0.01）。2.基因芯片结果显示，累计从大鼠血清中检测到723种循环miRNAs，按照FC＞2、Flag/Call值＞3及P＜0.05的标准，从低氧14d组及对照组大鼠间筛选出6种差异化表达的miRNAs，其中低氧组中表达

6、上调的miRNA有3种（let-7d、miR-451、miR-505），表达下调的miRNA有3种（miR-455-3p、miR-455-5P、miR-214）。3.荧光定量PCR定量验证结果显示，与对照组相比，低氧14d组大鼠血清中miR-451、miR-505、let-7d表达上调（P＜0.01），miR-214表达下调（P＜0.05），miR-455和miR-455-5p表达与对照组相比无显著差异；ROC曲线表明，miR-451、miR-505及let-7d的用于鉴别低氧性HPH大鼠和对照组大鼠的曲线下面积（AUC）均

7、大于0.8，且与机体脂质过氧化指标丙二醛（MDA）含量均正相关。结论：模拟海拔6000m高原环境低压低氧14d即可成功建立低压低氧诱发肺动脉高压的大鼠模型；基于大鼠模型，获得了低压低氧暴露条件下HPH模型大鼠循环miRNA表达谱，初步发现4种循环miRNA在HPH大鼠和对照组大鼠间存在显著性差异化表达，可能与HPH病理变化相关。关键词：低氧性肺动脉高压，循环miRNAs，基因芯片，荧光定量PCR，生物标志物IAbstractObjective：：：Toinvestigatethefeasibilityofusingcircu

8、latingmiRNAsasearlydiagnosticmarkersofHypoxicPulmonaryHypertension(HPH),andlaythefoundationforthefunctionofcirculatingmiRNAs,weestablishedhypobar