多克隆抗体介导的获得性adamts13缺陷小鼠模型的建立

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1、授予单位代码10089学号或申请号20122055HebeiMedicalUniversity科学学位多克隆抗体介导的获得性ADAMTS13缺陷小鼠模型的建立研究生：李峥嵘导师：张敬宇副教授专业：内科学二级学院：第二医院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公幵和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验

2、材料、原始数据、甲报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。//y•-二t.“研究生签名#<导师签章二级学院领导.'貪、j年”^_日^；河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。•‘'!•:、>、、.-研究生签名：导师签章：2口年J月Z]日目录中文摘要1英文摘要4英文缩写8研究论文多克隆抗体介导的获得性ADAM

3、TS13缺陷小鼠模型的建立90U59材料与方法10结果17酬19赚21讨论23组仓24参考文献24综述血栓性血小板减少性紫癜动物模型和临床治疗进展27雜42个人简历43中文摘要多克隆抗体介导的获得性ADAMTS13缺陷小鼠模型的建立摘要目的：血栓性血小板减少性紫癜（thromboticthrombocytopenicpurpura，TTP）是一种临床上少见但严重危及患者生命的血栓性微血管病。其主要临床特征为血小板计数减低、微血管病性溶血性贫血、神经精神症状、肾脏损害和发热。如前三者同时存在称之为TTP“三联症”

4、，若三联症基础上合并肾脏损害和发热则称之为TTP“五联征”。TTP的基本发病机制是血浆中裂解血管性血友病因子（vonWillebrandfactor，VWF）的金属蛋白酶ADAMTS13活性的严重减低。根据病因和发病机制的不同，TTP可以分为遗传性TTP（Upshaw-Schulman综合征）和获得性TTP。其中，遗传性TTP的ADAMTS13活性降低是由于ADAMTS13的基因突变所致，而获得性TTP则是由于患者血浆中存在的针对ADAMTS13的自身抗体或抑制物导致的ADAMTS13活性降低。在美国，每年新发

5、获得性TTP比例为3-10例/百万人群。据此推算，我国每年新增的获得性TTP患者人数应在5000人以上。在发现ADAMTS13的最初一段时间很多学者认为单独的ADAMTS13活性缺乏可以引发TTP。但随着研究的深入，人们逐渐对上述观点产生了质疑。本实验通过应用抗ADAMTS13的多克隆抗体ab71550来建立获得性ADAMTS13缺陷的129×1/SvJ系小鼠模型，以进一步探究单独的获得性ADAMTS13活性缺陷是否能够导致小鼠发生TTP，抑或是ADAMTS13基因敲除小鼠一样仅仅表现为体内的高凝状态。方法：1

6、研究对象的选取和分组：选取7只129×1/SvJ系小鼠，随机分为实验组和对照组。实验组3只，对照组4只。另取1只小鼠，增加实验组用药剂量重复实验。2观察和检测项目：小鼠神经精神改变、小鼠外周血涂片破碎红细胞镜检、微量血血小板计数和血红蛋白浓度测量、ADAMTS13活性测定（FRETS-VWF86荧光底物法）、UL-VWF多聚体分析（VWF垂直电泳法）和组织病理学分析。1中文摘要3标本的采集与处理：采用小鼠内眦静脉取血方法，以柠檬酸钠抗凝，离心后留取血浆，-70℃冻存备用。另取微量血进行血小板计数和血红蛋白浓度测

7、定，同时留取外周血涂片，显微镜观察有无破碎红细胞。共计采血5次，分别留取用药前、用药24小时、48小时、72小时、96小时的血液标本备用。最后一次采血结束后，将小鼠麻醉并脱颈椎处死，解剖留取肝脏、肾脏、脾脏、心脏和脑组织，并将上述组织用福尔马林固定，备用组织病理分析。4统计学分析：用SPSS16.0对实验数据（包括血小板计数、ADAMTS13活性及血红蛋白浓度）进行正态性检验，符合正态性分布后以均数±标准差（xs）表示。两组间采用studentt-test检验方法，以P值＜0.05认为有统计学意义。结果:1实

8、验组和对照组（抗体用药剂量均为600ug/kg）①神经精神症状：整个实验过程中，实验组和对照组小鼠均未出现神经精神症状改变。②外周血涂片：实验过程中，实验组和对照组动物外周血涂片镜检均未发现破碎红细胞。③血小板计数相关分析：实验组和对照组小鼠在用药前、用药24小时、48小时、72小时和96小时的血小板计数无差别（实验数据满足正态分布，方差齐，P﹥0.05）。④血红蛋白浓度分析：实验组和