新生小鼠脑白质损伤模型的建立

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1、郑州大学硕士学位论文新生小鼠脑白质损伤模型的建立姓名：段璐琦申请学位级别：硕士专业：儿科学指导教师：朱长连201205摘要新生小鼠脑白质损伤模型的建立研究生：段璐琦导师：朱长连专业：儿内科郑州大学第三临床学院河南郑州450052背景及目的随着医疗技术发展，早产儿存活率明显增加，早产儿由于脑不成熟性极易发生损伤，引起早产儿远期不良预后如脑瘫、认知障碍等。早产儿脑损伤主要表现为脑白质损伤即脑室周围白质软化(periventricularleukomalacia，PVL)，并伴随灰质的损伤。在早产儿脑白

2、质损伤高发的胎龄24．32周，脑室周围白质中少突胶质前体细胞含量丰富并具有选择易损性，少突胶质前体细胞是早产儿脑白质损伤中的靶细胞。围产期缺氧缺血与感染／炎症是导致少突胶质前体细胞损伤的两个主要上游机制，小胶质细胞激活、兴奋氨基酸毒性、氧化应激是导致少突胶质前体细胞损伤的三个主要下游机制，生命早期的缺氧被认为导致脑的缺氧缺血(rIO并导致早产儿脑损伤。在啮齿动物中少突胶质前体细胞(04+01)在生后2．5天丰富，啮齿动物HI模型即Vannucci模型是研究新生儿脑损伤最常用模型，常建立在生后7-9

3、天的大鼠或小鼠，也有建立在生后3．6天的大鼠与生后6．7天的小鼠，但是缺少建立在少突胶质前体细胞较为丰富的生后2．5天的小鼠HI模型。本试验目的应用5日龄小鼠缺血缺氧模型，观察小鼠脑损伤情况，选择合适的缺氧缺血时间，建立与早产儿脑白质损伤病理改变相似的小鼠缺氧缺血模型。材料及方法新生5日龄C57BL／6日龄小鼠结扎左侧颈总动脉，术后在恒温箱中给予吸I摘要入10％氮氧混合气体，试验共分2组，缺氧缺血组和正常对照组，缺氧缺血组根据缺氧时间分为缺氧50分钟组，70分钟组与80分钟组。试验动物在缺氧缺血后

4、3、7天后处死取脑行免疫组化染色，评估不同缺氧缺血时间对脑损伤体积、脑损伤部位及炎症反应的影响。结果缺氧缺血50分钟组小鼠于缺氧缺血后3天处死，发现仅有3／12(25％)出现脑损伤，损伤的部位位于动脉结扎侧海马，可见CAl．CA3区神经元丢失，动脉结扎对侧没有损伤，仅有2／12(17％)dx鼠在动脉结扎侧表现轻微的局限的脑白质损伤；缺氧缺血后7天，脑白质体积没有明显变化。缺氧缺血70分钟组小鼠，在缺氧缺血后3天有13／14(93％)的小鼠表现脑损伤，损伤的特点为结动脉扎侧海马的萎缩伴随局限性白质损

5、伤同时也出现小面积皮层损伤，损伤部位可见激活的小胶质细胞；缺氧缺血后7天，皮层下白质体积减少14．0±4．2％，较对照组明显减少。缺氧缺血80分钟组小鼠，缺氧缺血后3天14／16(88呦的小鼠表现脑损伤，6／16(37．5％)的小鼠在动脉结扎侧皮层、海马、白质与丘脑出现严重梗死。在所有HI的小鼠中，皮层下白质中激活的小胶质细胞均增多。结论出生后5日龄小鼠缺氧缺血70分钟产生局限性白质与灰质损伤，病理表现与早产儿脑损伤病理改变相似，5日龄小鼠缺氧缺血70分钟作为早产儿脑白质损伤模型进行发病机制及防治

6、的研究。关键词：早产，脑损伤，缺血，缺氧，小鼠IIAbstractAnewbornmousemodelwhitematterinjuryPostgraduate：LuqiDuanSupervisor：ChanglianZhuDepartmentsofPediatricsTheThirdClinicalCollegeofZhengzhouUniversity，Zhengzhou，ChinaBackgroundandObjectiveOwingtoimprovedsurvivalratesofprem

7、aturenewborns，thenumberofpreterminfantsisrising．Astheimmatureofthepreterminfantbrain,braininjuryaswellasneurodisabilityincludingcerebralpalsy、cognitivedeficitsarequitecommoninpreterminfants．Theencephalopathyofprematurity,consistingofperiventricularleu

8、komalacia(PVL)accompaniedbydementsofgraymatterinjury,isthemostcommonformofbraininjurytothepretermbrain．Whitemattereasilyinjuryedatgestationalweeks24-32correspondingtoahighproportionofpremyelinatingoligodendrocytes(04+oD．Premyelinatingoligodend