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时间:2018-11-11
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1、IgA肾病小鼠模型的建立与鉴定【摘要】目的建立小鼠IgA肾病模型,为临床研究IgA肾病提供实验依据。方法昆明种小鼠30只,分为正常对照组(10只)、模型组(20只)。采用口服牛血清白蛋白(BSA)联合尾静脉注射葡萄球菌肠毒素B(SEB)的方法制作小鼠IgA肾病模型。第12周末收集新鲜尿液,显微镜下尿红细胞定性检验;摘眼球取血,检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);光镜法观察肾小球系膜细胞及基质变化;电镜法检测系膜区有无电子致密物沉积;免疫荧光法观察系膜区IgA沉积情况。结果第12周末,模型组小鼠均出现不同程度的
2、血尿;Scr、BUN较正常对照组显著增高(P<0.01);光镜下系膜细胞及基质明显增生;电镜下系膜区电子致密物沉积;免疫荧光示系膜区大量的IgA沉积,而正常对照组则无上述表现。结论IgA肾病小鼠模型效果良好,病理、电镜及临床指标与人类IgA肾病临床病理相似。【关键词】IgA肾病;模型;血尿;免疫荧光;小鼠 Abstract:ObjectiveToestablishmousemodelofIgAnephropathyinordertoprovideexperimentbasisfortheclinicalr
3、esearchofIgAnephropathy.Methods30Kunmingmicelyassignedintothecontrolgroup(n=10)andthemodelgroup(n=20).MousemodelofIgAnephropathyethodoforalintakeofbovineserumalbumin(BSA)togetheraturia;bloodinetheserumcreatinine(Scr)andbloodureanitrogen(BUN);thechangesofmesan
4、gialcellsandmatrixinthekidneysicroscopy;electronmicroscopyployedtodetectelectron-densedepositsinthemesangialarea;theexpressionofIgAdepositioneasuredbyimmunofluorescencestaininginthemesangialarea.ResultsBytheendof12aturiainmodelgroupmice.BUNandScrlevelsinmodel
5、groupalcontrolgroup(P<0.01).Lightmicroscopyshoesangialcellsandmatrix.Electronmicroscopydemonstratedahighelectrondensedepositioninthemesangialarea,alitiesalcontrolgroup.ConclusionThemousemodelofIgAnephropathyproveseffective,icroscopicandclinicalparameterssi
6、milartotheclinicalpathologyofhumanIgAnephropathy. Keyodel;hematuria;immunofluoresencestaining;mice IgA肾病世界范围内广发的一种系膜增生型肾小球肾炎,占原发性肾小球疾病的10%~20%,中国、日本、新加坡等发病率较高,其中有20%~30%的患者进展到肾衰[1]。建立与人类临床病理生理相似的IgA肾病动物模型,对研究IgA肾病的发病机理、临床治疗等具有重要的作用。本实验采用口服牛血清白蛋白联合尾静脉注射葡萄球菌肠
7、毒素的方法制作IgA肾病小鼠模型,为进一步探索IgA肾病提供实验依据。 1材料和方法 1.1实验材料 1.1.1实验动物昆明种小鼠30只,鼠龄(10-12)周,体重20~26g,雄性,动物编号SCXK(苏)2005-0005,由徐州医学院实验动物中心提供。 1.1.2主要实验试剂和设备牛血清白蛋白(BSA,上海明睿生物有限公司,产品批号RF101-010);葡萄球菌肠毒素B(SEB,北京博迈世纪生物技术有限公司);兔抗小鼠IgA抗体(北京博奥森生物技术有限公司,抗体货号bs-0774R);异硫氰酸荧光素(
8、FITC)-标记的羊抗兔IgG(Milliporecorporation);MicromHM340石蜡切片机;光学显微镜(日本Carton);日本SysmexCA-1500自动生化分析仪;电镜(H-600),切片机(LKBV型)。 1.2实验方法 1.2.1酸化水的制备新鲜的双蒸水中加入盐酸,浓度为8.5mmol/L。即1000ml双蒸水中加入10%盐酸3.2ml。1
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