黑木耳多糖-顺铂-叶酸配合物合成及抗HeLa细胞增殖作用机制.pdf

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1、博士学位论文黑木耳多糖-顺铂-叶酸配合物合成及抗HeLa细胞增殖作用机制SYNTHESISANDANTI-PROLIFERATIONAGAINSTHELAMECHANISMOFAURICULARIAAURICULAPOLYSACCHARIDE-CISPLATIN-FOLATECOMPLEX邱军强哈尔滨工业大学2018年4月国内图书分类号：TS201.4学校代码：10213国际图书分类号：577密级：公开工学博士学位论文黑木耳多糖-顺铂-叶酸配合物合成及抗HeLa细胞增殖作用机制博士研究生：邱军强导师：王振宇教授申请学位：工学博士学科：化学工程与技术所在单

2、位：化工与化学学院答辩日期：2018年3月授予学位单位：哈尔滨工业大学ClassifiedIndex:TS201.4U.D.C.:577DissertationfortheDoctoralDegreeinEngineeringSYNTHESISANDANTI-PROLIFERATIONAGAINSTHELAMECHANISMOFAURICULARIAAURICULAPOLYSACCHARIDE-CISPLATIN-FOLATECOMPLEXCandidate：QiuJunqiangSupervisor：Prof.WangZhenyuAcademicDeg

3、reeAppliedfor：DoctorofEngineeringSpeciality：ChemicalEngineeringandTechnologyAffiliation：SchoolofChemistryandChemicalEngineeringDateofDefence：March,2018Degree-Conferring-Institution：HarbinInstituteofTechnology摘要摘要针对化疗药物在癌症治疗过程中存在生物效应差，不能直接进入发病组织，对肿瘤细胞缺乏靶向性和毒副作用强等问题。本论文以AAP(V)作为研究对

4、象，采用响应面设计优化AAP(V)-CDDP配合物的合成工艺，并进行结构表征。同时合成了FA-AAP(V)-CDDP配合物，在体内建立裸鼠移植瘤模型对其抗肿瘤活性进行评价；应用体外MTT染色法、电感耦合等离子体原子发射光谱法（ICP-AES）、HE染色、免疫组化和免疫印迹法对FA-AAP(V)-CDDP体外和体内抑制肿瘤增殖活性及其毒副作用进行研究，并揭示了其抗肿瘤机制。通过超声波处理制备的不同分子量AAP与顺铂形成的配合物，发现AAP-CDDP发挥抑制宫颈癌HeLa和结肠癌LoVo肿瘤细胞增殖活性与其配合顺铂量密切相关，相关系数R2分别为0.8775和

5、0.9132；其中AAP(V)-CDDP具有最强的抗肿瘤细胞增殖活性。采用气质联用（GC-MS）、红外光谱（FT-IR）、核磁共振光谱（NMR）对AAP(V)的理化性质和化学结构进行分析，结果表明AAP(V)为一种具有高分支结构的葡聚糖，粘均分子量为4.50×103，其所含鼠李糖、葡萄糖、木糖、甘露糖和半乳糖的摩尔比为0.3：17.1：0.3：3.1：63.2，通过进一步对AAP(V)甲基化分析，并利用NMR对其糖残基的连接方式进行分析，AAP(V)中含有→6)-α-D-Galp-(1→、-Manp-(1→、→3,4)-α-D-Manp-(1→、→3)-

6、α-D-Manp-(1→和→6)-α-D-Glcp-(1→等残基。采用“onepot”法合成AAP(V)-CDDP配合物，利用响应面设计对AAP(V)-CDDP合成工艺进行优化，得到最佳合成条件为：反应温度56.9℃、反应时间1.8h、反应pH7.7、多糖与顺铂的质量比为6:1，所得到的AAP(V)与CDDP配合率为95.9±0.1%。结果证实了AAP(V)-CDDP的合成过程中羟基基团参与了配位反应。通过红外光谱（FT-IR）、核磁共振光谱（NMR）对FA-AAP(V)-CDDP进行结构表征，Zetasizer测得其粒径为178.0±0.4nm（PDI

7、=0.2），表面电位为-20.0±1.0mV，FA-AAP(V)-CDDP中叶酸含量为13.8±0.3%，制备FA-AAP(V)-CDDP中CDDP具有一定的缓释作用，同时在小鼠机体血液中具有更长的循环时间。AAP(V)-CDDP和FA-AAP(V)-CDDP引起的溶血率较低，均低于5.0%，体外细胞摄取实验证实，与AAP(V)-CDDP相比，HeLa细胞对FA-AAP(V)-CDDP的摄取率提高了2倍~11倍，体外抗肿瘤细胞增殖实验表明FA-AAP(V)-CDDP-I-哈尔滨工业大学工学博士学位论文对HeLa细胞和LoVo细胞的IC50值分别为3.1μ

8、g/mL和3.7μg/mL。通过体内建立HeLa裸鼠移植瘤模型，发现与CDDP相