利用生物素—链霉亲和素进行骨髓间充质干细胞表面标记的实验研究

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1、分类号：密级：UDC：学号：416522612649南昌大学硕士研究生学位论文利用生物素-链霉亲和素进行骨髓间充质干细胞表面标记的实验研究Studyonthesurfacelabelingofthebonemarrowmesenchymalstemcellbybiotin-streptavidin陈淑兰培养单位（院、系）：江西省人民医院指导教师姓名、职称：李赟教授申请学位的学科门类：临床医学学科专业名称：内科学论文答辩日期：2015年5月答辩委员会主席：涂卫平评阅人：盲审盲审2015年6月学位论

2、文独创性声明学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：罗富里签字日期：2015年6月6日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向

3、国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：罗富里导师签名（手写）：李赟签字日期：2015年6月6日

4、签字日期：2015年6月6日论文题目利用生物素-链霉亲和素进行骨髓间充质干细胞表面标记的实验研究姓名罗富里学号416522612649论文级别博士□硕士√院/系/所南昌大学医学部专业内科学（肾脏病）E_mail备注：√公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）I摘要摘要目的：1、通过生物素-链霉亲和素反应体系建立一种简单可行的细胞表面化学修改方法。2、评价生物素和链霉亲和素进行骨髓间充质干细胞表面标记的效率。3、探讨此种化学共价结合方法对骨髓间充质干细胞生物学功能的影响,为这项技术

5、在促进干细胞在急性肾损伤中归巢中的研究奠定实验基础。方法：1、通过全骨髓培养法得到第三代骨髓间充质干细胞备用，并采用流式细胞仪鉴定BMSCs；2、以磺化生物素-N-羟基琥珀酰亚胺、生物素、链霉亲和素为材料，通过共价结合的化学方法将粘附分子配体SLeX装备到BMSCs表面；3、通过荧光显微镜评估化学修改方法进行BMSCs表面标记的效率；4、采用台盼蓝染色法检测化学修改方法对BMSCs细胞活性的影响；5、CCK-8比色法检测化学修改方法对BMSCs的细胞增殖功能影响；6、成脂、成骨诱导检测化学修改方

6、法对BMSCs多分化功能的影响。结果：1、骨髓间充质干细胞表面标志物鉴定：通过全骨髓培养法培养2周，可得到第三代BMSCs，采用流式细胞仪进行BMSCs细胞表型鉴定，结果如下：CD9099.9%；CD2999.8%,CD340.1%，CD450%，符合BMSCs表型2、化学修改方法效率的评估：通过生物素及链霉亲和素进行BMSCs表面标记，细胞表面修改成功率达（87.8±3.1%），明显比对照组B+S(33.2±1.3)%（P<0.001）和P+S组（6.4±1.3%）（P<0.001）高；3、化

7、学修改方法对BMSCs生物学特性的影响：BMSCs细胞活性在BNHS化学修饰细胞后24h和48h细胞活性为83%和76%，CCK-8检测细胞的增殖功能发现，BNHS修饰后72h细胞增殖功能受一定影响。BNHS修饰的细胞和PBS处理后BMSCs均能被成功能诱导分化，成脂诱导23后进行油红染色均可见大量脂质沉淀，成骨诱导23天后茜素红染成骨分化细胞均可见明显深红色矿化结II摘要节。结论：1、本研究通过生物素-链霉亲和素反应体系成功将粘附分子配体装备到骨髓间充质干细胞表面，本方法进行细胞表面标记，操作

8、简单、反应条件温和。2、本标记方法效率高，而且对细胞的毒性小，对细胞增殖、分化功能影响不大。3、这项技术对于针对特定组织的细胞靶向治疗具有广泛的运用前景，可能有助于促进干细胞在急性肾损伤中的归巢。关键词：骨髓间充质干细胞；急性肾损伤；生物素-链霉亲和素；磺化生物素-N-羟基琥珀酰亚胺；唾液酸化的路易斯抗原IIIAbstractABSTRACTObjective1,Throughthebiotinstreptavidinreactionsystemtoestablishasimpleandfeas