磁标记骨髓间充质干细胞治疗糖尿病实验地研究

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1、山西医科大学硕士学位论文磁标记骨髓间充质干细胞治疗糖尿病的实验研究摘要研究背景间充质干细胞可白骨髓等多种组织分离得到，近年来，间充质干细胞移植已经成为心血管疾病，神经系统疾病等多种疾病治疗的种子细胞。研究目的本实验采用磁共振成像(MⅪ)进行标记细胞的体外示踪及移植细胞的糖尿病体内示踪，探讨不同浓度及时间超顺磁性氧化铁颗粒(SPIO)标记兔骨髓问充质干细胞(MSCs)的标记效率、标记后活力以及标记后体外成像情况，为临床体内MRI寻找最佳标记“浓度——时间”。尝试在常规1．5T磁共振(凇)的成像条件下，对

2、较小动物兔的胰腺、肾脏等器官进行解剖成像和移植细胞的示踪；初步动态观察移植细胞在糖尿病兔体内的活体成像特点及规律，为临床干细胞移植治疗糖尿病疗效评估开创新方法。研究方法(1)MSCs的培养及鉴定。选择健康家兔，采用密度梯度离心法和贴壁筛选法分离、培养、纯化骨髓MSCs，观察细胞在光镜下的生长特征并记录其生长曲线，VonKassa方法检测成骨诱导骨髓MSCs，对所获得的细胞进行表面抗原(CD44、CD45和CD了，)的检测，确定所获细胞绝大多数为骨髓MSCs。(2)标记细胞的体外成像。配制不同浓度含SP

3、IO的培养基f铁终浓度分别为25pg／ml、50pg／ml、751ag／ml、1001ag／ml、1501ag／m1)，加入骨髓MSCs孵育标记。标记后1天、3天、1周、2周、3周、4周行普鲁士蓝染色、细胞活力检测及标记细胞体外M对，并经MRI确定合适的标记时间和标记浓度。(3)移植细胞糖尿病兔MRI活体示踪。制备兔糖尿病模型，将SPIO标记的骨髓MSCs和未标记的骨髓MSCs经静脉移植入糖尿病兔体内，用测定血糖的方法评价细胞移植前、后对糖尿病高血糖的治疗效果。同时经MR动态观察移植细胞的定位、存活及

4、迁徙。研究结果(1)骨髓MSCs培养、鉴定：骨髓MSCs呈梭形、漩涡状生长。骨髓MSCs经成骨诱导后表达骨细胞特征。流式细胞仪表面标志鉴定CD45呈阴性，CD44、CD'／J：呈阳性。(2)SPIO可有效标记MSCs，细胞活力检测显示时间为1天和3天时，剂量Opg／n11组与25pg／ml组，O肛∥ml组与50pg／ml组，25pg／ml组与5099／ml组的细胞拒感率没有差别(P>O．05)。体外MRI示标记3天时，标记浓度为50,g／Inl组，T2WI及T2*WI信号降低最明显。(3)建立了兔糖尿

5、病模型，其血糖稳定>16．8mmol／L。血糖检测显示MSCs移植可有效降低糖尿病血糖升高，MRT2WI、T2*WI序列均可示踪糖尿病兔体内移植SPIO标记骨髓MSCs。MRI可对标记细胞示踪至注射后10天。研究结论联合采用密度梯度离心和贴壁筛选的方法易于分离、纯化获得纯度较高的MSCs。50pg／ml浓度，标记3天的组合不仅标记效率高，对细胞活力无影响而且细胞体外MRI信号强度降低最明显，为最适标记“浓度——时间”组合。磁标记与未标记的骨髓MSCsⅡ山西医科大学硕士学位论文均能有效治疗糖尿病高血糖。

6、临床型1．5TMR可对糖尿病兔体内标记细胞进行无创性活体示踪，并较长时间地动态观测细胞的存活与迁徙。关键词：骨髓间充质干细胞；超顺磁眭氧化铁；磁共振成像；糖尿病；移植m山西医科大学硕士学位论文ThepreliminarystudyoftreatingdiabeteswithsuperparamagneticironoxidelabeledrabbitmesenchymalstemcellsAbstractBackgroundMesenchymalstemcells(MSCs)canbeisolated

7、frombonemarrowandSOonandcanbeusedcelltherapywhichhavebeenusedcardiovasculardiseases，nervoussystemdiseasesandSOOILobjectiveThepurposeofthisstudywaslabeledcellsofvitroMRItestandtodeterminewhetherSPIOlabeledbonemarrowMSCscouldbedetectedandtrackednoninvasiv

8、elybyMRIindiabeticrabbitmodels．Toexplorethelabeledefficiency,cellularviabilityofrabbitmesenchy’malstemcellsandvitroimagingofthelabeledbonemarrowMSCswithdifferentconcentrationandtimeofsuperparamagneticironoxide(SPIO)，andfindthebes