wistar大鼠骨髓间充质干细胞的培养、鉴定和标记

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1、Wistar大鼠骨髓间充质干细胞的培养、鉴定和标记作者：赵科研柳克祥侯明晓孙江滨吴慧颖李博【摘要】　　目的建立Wistar大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）分离、培养的方法，并进行鉴定、标记。方法采用全骨髓贴壁培养法分离培养大鼠的MSCs。采用相差显微镜观察MSCs的形态学特征；流式细胞仪检测第3代细胞表面标志抗原CD29、CD44、CD34和CD45的表达率；电镜检查第3代MSCs超微结构。DAPI标记MSCs为下一步进行体内细胞移植示踪。结果原代培养的MSCs于6～8h后贴壁，6d左右形成集落，1

2、4d左右可达到80%～90%融合。第3代细胞表面标记物CD29，CD44，CD34和CD45的阳性率分别为98.6%，78.2%，0.0%，0.3%。超微结构清晰，可见细胞器，如线粒体、粗面内质网和高尔基复合体，细胞核呈圆形或不规则，可见较多微绒毛。DAPI可良好标记MSCs细胞核，呈蓝色荧光。结论采用全骨髓贴壁培养的方法能够成功分离和培养大鼠的MSCs，在第3代可获得高纯度MSCs。DAPI可以作为一种示踪剂标记MSCs。9【关键词】细胞培养；间充质干细胞；种子细胞；示踪剂【Abstract】Ob

3、jectiveToestablishamethodforisolationandcultureofbonemarrowmesenchymalstemcells(MSCs)fromWistarratsinvitro,andtoidentifycharacteristicofthecellsandtolabelthemaftercultureexpansion.MethodsMSCswereisolatedandcultivatedfromthebonemarrowofWistarratsbyadher

4、entmethod.ThemorphologyofMSCswasobservedunderphasecontrastmicroscope.TheexpressionofCD29,CD44,CD34andCD45ofthethirdgenerationcellswereanalyzedbyflowcytometry.ElectronmicroscopicfeatureswerealsoobservedandMSCswerelabeledbyDAPI.ResultsAfter6to8hprimarycu

5、lture,MSCsadheredtoplasticsurfaceoftheculturedish.　About6dlater,thecellsproliferatedincolonies.PrimaryMSCsreached80%～90%ofconfluencein14dapproximately.ThepositiveratesofCD29,CD44,CD34,andCD45inMSCsatthirdgenerationwere98.6%,78.2%,0.0%,and0.3%respective

6、ly.UndertheelectronmicroscopeMSCshadplentifulcytoplasmwithmitochondriaroughendoplasmicreticulaandGolgicomplexes.Theirnucleiwereroundorirregularandtherewereplentyofmicrovillionthesurface.AlloftheMSCsafterlabelingbyDAPIshowedbluefluorescencebyfluoroscope

7、.ConclusionsMesenchymalstemcells9canbesuccessfullyisolatedandcultivatedbyadherentmethod.AndhigherpurityMSCscanbepickedupaftercultureexpansionatP3.DAPIcanbeaneffectivetraceragenttolabelMSCs.【Keywords】Cellculture;Mesenchymalstemcells;Seedcells;Traceragen

8、t　　骨髓间充质干细胞（mesenchymalstemcells，MSCs）是一类具有自我更新和多向分化潜能的非造血干细胞，可以向骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、干细胞、肌细胞、神经细胞以及心肌细胞分化〔1，2〕，具有高度可塑性，易于体外扩增，因其来源充足、取材方便，体外增殖能力相对较强，而且在异体移植中排斥反应小，被认为是组织工程和基因工程的理想种子细胞，为心血管疾病、神经疾病和骨关节疾病的治疗提供了一条全新的治疗方案。本文在总结贴壁分离法培养MSCs的基础上，优化MS