内质网跨膜蛋白抑制剂对大鼠矽肺纤维化的干预作用研究

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1、中图分类号：R135.2论文编号：HBLG2015-024UDC：密级：公开硕士学位论文内质网跨膜蛋白抑制剂对大鼠矽肺纤维化的干预作用研究作者姓名：何艳玲学科名称：公共卫生与预防医学研究方向：劳动卫生与环境卫生学学习单位：华北理工大学学习时间:3年提交日期:2015年4月21日申请学位类别：医学硕士导师姓名：姚三巧教授单位：华北理工大学公共卫生学院金玉兰副教授单位：华北理工大学公共卫生学院论文评阅人：吴卫东教授单位：新乡医学院公共卫生学院韩光亮教授单位：新乡医学院公共卫生学院论文答辩日期：2015年6月8日答辩委员会主席：赵金垣教授关键词：

2、内质网应激；抑制剂；矽肺；肺纤维化唐山华北理工大学2015年6月RoleofEndoplasmicReticulumTransmembraneProteinInhibitorintheTreatmentofSilicosisRatsDissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofMedicinebyHeYanling(PublicHealthan

3、dPreventiveMedicine)Ph.DYaoSanqiaoSupervisor:Ph.DJinYulanJune,2015独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用

4、学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：□自授予学位之日起；□自年月日起。作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要摘要目的研究内质网跨膜蛋白肌醇需求酶1（inositolrequiringenzyme1,IRE1）、活化转录因子6（activatingtranscriptionfactor6,ATF6）和双链RNA依赖的蛋白

5、激酶样内质网类激酶（PKRlikeERkinase,PERK）抑制剂对染矽尘大鼠内质网应激（ERS）凋亡途径的影响，评价三种抑制剂对大鼠矽肺纤维化的干预效果。方法无特定病原体（Speceficpathogenfree,SPF）级健康成年雄性SD大鼠100只，大鼠按体重随机分为5组：生理盐水对照组、矽肺模型组、IRE1抑制剂组、ATF6抑制剂组和PERK抑制剂组，每组20只。除生理盐水对照组外，其它各组大鼠均采用非气管暴露法一次性注入质量浓度为50.0g/L的二氧化硅混悬液1.0ml造模，对照组注入等体积灭菌0.9%生理氯化钠溶液。造模第28

6、d，每组随机选取2只大鼠处死。第28天三个抑制剂组大鼠开始给予不同的干预处理，各组分别于染尘后第56天、第84天处死大鼠各8只。收集左侧肺泡灌洗液，分离、纯化和培养肺泡巨噬细胞（AlveolarMacrophage,AM），流式细胞术检测AM线粒体去极化率和活性氧（reactiveoxygenspecies,ROS）阳性率；取右侧肺组织适量，实时定量荧光聚合酶链式反应（Real-timePCR）检测C/EBP同源蛋白（C/EBP-homologousprotein,CHOP）、ATF6、P-PERK、Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA的相对表达水平；

7、取适量肺组织匀浆、细胞裂解后，免疫印迹法测定肺组织内葡萄糖调节蛋白-78（proteinglucose-regulatedprotein78,GRP78）、IRE1α、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白（Bcelllymphoma/lewkmia-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2assioatedXprotein,Bax）和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12（cysteinylaspartatespecificproteinase,Caspase-12）的相对表达水平。右侧肺中叶组织经10%中性甲醛固定，常规制作石蜡切片，苏木素

8、-伊红染色，光学显微镜观察肺组织病理变化。结果1不同组别大鼠肺组织病理变化：生理盐水对照组大鼠肺组织结构基本正常，周围无炎症细胞浸润，随着染尘时间的延长，生理盐水对照组大鼠肺组织