大鼠矽肺差异蛋白的筛选及s100a8在矽肺纤维化中作用的实验研究

《大鼠矽肺差异蛋白的筛选及s100a8在矽肺纤维化中作用的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中图分类号：R364.3论文编号：HBLG2015-088UDC：密级：公开硕士学位论文大鼠矽肺差异蛋白的筛选及S100A8在矽肺纤维化中作用的实验研究作者姓名：李鑫学科名称：病理学与病理生理学研究方向：矽肺分子病理学学习单位：华北理工大学学习时间:3年提交日期:2015年4月26日申请学位类别：医学硕士导师姓名：郑素琴教授单位：华北理工大学基础医学院论文评阅人：王献华教授单位：华北理工大学王海涛教授单位：华北理工大学论文答辩日期：2015年6月15日答辩委员会主席：张祥宏教授关键词：矽肺；差异蛋白；钙结合蛋白S100A8唐山华北理工大学2015年6月ScreeningofDiffere

2、ntiallyExpressedProteinsinRatSilicosisandExperimentalStudyontheRoleofS100A8inSilicosisDissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceAndTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofMedicinebyLiXin(PathologyandPathophysiology)Supervisor:ProfessorZhengSuqinJune,2015独创性说明

3、本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开

4、、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：□自授予学位之日起；□自年月日起。作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要目的本研究通过制备不同时期的矽肺大鼠模型，利用蛋白质组学中的双向凝胶电泳和质谱分析技术，探讨在不同时期矽肺大鼠肺组织中均呈明显差异表达的蛋白种类，并挑选其中评分最高的一种蛋白（S100A8）在矽肺动物模型和细胞水平加以验证，了解S100A8与矽肺的相关性，为矽肺的发病机制的进一步研究提供实验依据。方法1大鼠矽肺模型的复制：SPF级雄性Wistar大鼠90只适应性饲养一周，随机分为2组，模型组（即染矽尘组）60只、空白对照组30只。模型组利用非暴露

5、气管法一次性灌注SiO2悬液复制矽肺模型，空白对照组以灭菌生理盐水替代。建模时间记为0周，于染尘后1周、2周、3周、4周、6周和8周6个时间点处死模型组10只和空白对照组5只大鼠，同时肉眼观察大鼠肺脏病理变化，迅速取出肺组织，大部分保存在液氮中备用，并将余下肺组织甲醛固定以鉴定造模是否成功及免疫组化检查；2矽肺差异蛋白的筛选：利用双向电泳技术筛选矽肺的差异蛋白点，对所筛选的部分差异蛋白进行质谱分析；挑选其中评分最高的差异蛋白S100A8进行验证；3矽肺差异蛋白的验证：①制作大鼠模型组和空白对照组肺组织的石蜡切片，免疫组织化学检测S100A；②提取大鼠模型组和空白对照组的肺组织总蛋白及RN

6、A；③再选SPF级雄性Wistar大鼠建立矽肺模型，支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞，用SiO2进行刺激，18小时后收集上清液并保存；④体外肺纤维化模型的复制：胰酶消化法获取肺成纤维细胞，培养至第4代，用收集的SiO2刺激的巨噬细胞上清进行刺激；⑤制作细胞爬片，免疫细胞化学检测S100A8；⑥提取体外纤维化模型和空白空白对照组细胞的总蛋白及RNA；⑦Western-blot法和实时定量荧光PCR检测S100A8在大鼠矽肺模型和细胞水平不同时间点的表达情况，应用自动图像分析系统对结果进行图像分析；4应用SPSS16.0统计软件，对实验数据采用单因素方差分析比较多组间均数进行统计学分析。结果1

7、成功复制了大鼠矽肺模型；2双向电泳技术筛选出45个矽肺差异蛋白点，选取其中7个点质谱分析结果得到6个差异蛋白；3免疫组织化学和免疫细胞化学检查：空白对照组S100A8呈微弱表达，模型组S100A8表达高于空白对照组，随时间点增加而逐渐增强；4Western-blot法检测结果显示S100A8在空白对照组呈弱表达，在大鼠矽肺模型和细胞水平中的表达均高于空白对照组且呈逐渐升高，且组间差异有统计学意义（P<0.05）；5实时定量荧光PCR