saa通过tlr4信号通路促进类风湿关节炎血管新生的分子机制研究

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1、分类号：R446.1学校代码：10062密级：学号：2012602119硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：SAA通过TLR4信号通路促进类风湿关节炎血管新生的分子机制研究TITLEMolecularmechanismsofserumamyloidAfacilitatedangiogenesisthroughtoll-likereceptor4signalpathwayinrheumatoidarthritis一级学科：临床医学二级学科：临床检验诊断学论文作者：刘娜指导教师：郑芳教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R446

2、.1学校代码：10062密级：学号：2012602119学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：SAA通过TLR4信号通路促进类风湿关节炎血管新生的分子机制研究TITLEMolecularmechanismsofserumamyloidAfacilitatedangiogenesisthroughtoll-likereceptor4signalpathwayinrheumatoidarthritis一级学科：临床医学二级学科：临床检验诊断学论文作者：刘娜指导教师：郑芳教授天津医科大学研究生院二

3、〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文

4、，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的类风湿性关节炎（RA）是一种慢性炎症性疾病，其发病特点主要为对称性的多关节滑膜炎和大量新生血管的形成。已有研究结果显示血清淀粉样蛋白A（SAA）在其发病机制中发挥重要作用。本研究首先分析了TLR4在RA患者滑膜组织中的表达，并进一步检测了SAA与TLR4的相互作用对HUVECs产生促血管生成因子VEGF，Ang-1，Ang-2的影响。最后，通过体外构建三维血管模型，深入探讨S

5、AA与TLR4结合介导的NFκB信号途径在RA新生血管形成机制中的作用。本研究旨在探究SAA促进RA血管新生的分子机制，为RA的临床诊断和治疗寻找新的可靠的靶点奠定实验基础。方法1.免疫组织化学技术检测RA和OA患者滑膜组织中TLR4的表达。2.采用HUVECs体外细胞培养模型，细胞迁移实验和MTT实验分析SAA与TLR4的相互作用对内皮细胞迁移、增殖的影响。3.通过体外构建三维血管模型，分析SAA与TLR4的相互作用对内皮细胞形成新生血管的影响。4.ELISA方法分析SAA与TLR4的相互作用对内皮细胞产生促血管生成因子的影响。5.采用westernblo

6、t方法分析在人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中SAA-TLR4相互作用对NFκB信号途径活化的影响。结果1.免疫组化结果显示，TLR4广泛表达于RA滑膜组织的衬里层及衬里下层，主要表达在血管内皮细胞、成纤维细胞、巨噬细胞及血管周围；而在OA则少量表达于滑膜衬里层及成纤维细胞,且二者相比表达的量和位置均有显著差异。2.细胞迁移、MTT实验以及体外三维血管模型结果分别显示，SAA可显著促进HUVECs的增殖和迁移，以及相互连接构成新生血管；在TLR4被抑制后，SAA介导的内皮细胞的迁移、增殖程度以及血管新生明显受到抑制。3.ELISA结果显示SAA作用下HUVE

7、Cs可产生VEGF、Ang-1、Ang-2等促进新生血管形成的因子，而TLR4被抑制后，VEGF的生成明显减少，其他几种因子所受影响不明显。I天津医科大学硕士学位论文4.Westernblot实验结果显示HUVECs受SAA刺激后，NFκB分子明显活化，而一旦TLR4被抑制，NFκB的活化受到明显抑制。5.细胞迁移实验以及体外三维血管模型结果分别显示，在SAA作用下，HUVECs发生明显的迁移，并且相互连接构成新生血管；上述结果在NFκB被抑制后，明显受到抑制。结论1.TLR4在RA滑膜组织中呈高表达，且TLR4表达的位置和量与OA组相比均有显著差异，提示T

8、LR4可能参与了RA的炎症反应和关节损伤。2.阻断T