pi3kaktgsk-3β通路在莱菔硫烷调控心肌冷缺血再灌注损伤中的作用

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1、中图分类号：R654.2论文编号：HBLG2015-316UDC：密级：公开硕士学位论文PI3K/Akt/GSK-3β通路在莱菔硫烷调控心肌冷缺血再灌注损伤中的作用作者姓名：杨述亮学科名称：外科学研究方向：胸心外科学习单位：华北理工大学学习时间:3年提交日期:2015年5月5日申请学位类别：临床医学硕士导师姓名：李占清教授单位：华北理工大学附属医院论文评阅人：杨方教授单位：华北理工大学张景华教授单位：唐山市人民医院论文答辩日期：2015年6月6日答辩委员会主席：赵光明教授关键词：PI3K/Akt/GSK-3β通路；莱菔硫烷；心肌冷缺血再灌注损伤

2、；唐山华北理工大学2015年6月EffectofPI3K/Akt/GSK-3βPathwayinSulforaphaneonRegulatingColdIschemiaReperfusionInjuryinRatsHeartTransplantationDissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofClinicalMedicinebyYangShu

3、liang(Surgery)Supervisor:ProfessorliZhanqingJune,2015独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名日期：年&月々日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位

4、的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被査阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容釆用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：0自授予学位之□起;□自年月曰起作者签名：^导师金名：签字日期：年£月/。日签字日期：年（月加曰摘要摘要目的通过建立大鼠心脏移植模型，探讨PI3K/Akt/GSK-3β信号通路在SFN保护心肌冷IRI中的作用。方法64只SD大鼠（成年健康雄性，体重220-250g）随机分为4组（每组16只，药物干预均为受体）：IRI组：移植前24h

5、经尾静脉注射生理盐水0.3ml；SFN+IRI组：移植前24h经尾静脉注射SFN2.5mg/kg.bw；LY+IRI组：注射生理盐水前1h及移植前1h分别经尾静注射LY2940020.3mg/Kg.bw，余同IRI组；LY+SFN+IRI组：注射SFN前1h及移植前1h分别经尾静注射LY2940020.3mg/Kg.bw，余同SFN+IRI组。按照李占清等人的方法建立心脏移植模型：1摘取供体大鼠的心脏置于4℃HTK液中保存9h备用。2将供心用7-0丝线连续缝合于受体大鼠的腹腔（供心主动脉与受体腹主动脉吻合，供心肺动脉与受体下腔静脉吻合)，供心复

6、跳，检查无出血后关腹。术后24h摘取供心，一部分供心组织放入10%的福尔马林中固定，石蜡包埋、切片后行HE染色观察形态学变化并用免疫组织化学法检测Akt、P-Akt、GSK-3β、P-GSK-3β、Bcl-2、Bax的蛋白表达；另一部分放入液氮速冻后转存于-80℃冰箱保存备用，提取供心组织蛋白并用免疫印迹（Westernbolt）法检测Akt、P-Akt、GSK-3β、P-GSK-3β、Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果1组织学：IRI组与LY+IRI组的心肌损伤较严重，心肌组织的正常结构破坏，可见小血管扩张、充血，心肌纤维断裂、排列紊乱，细胞

7、水肿，心肌间质大量炎性细胞浸润；SFN+IRI组心肌损伤较轻：心肌组织结构清楚，小血管扩张、充血较轻，心肌纤维排列整齐、稍有断裂，细胞形态基本正常，心肌间质有少量炎性细胞浸润；LY294002+SFN+IRI组的心肌细胞形态、心肌纤维排列及断裂、心肌间质炎细胞的浸润情况均介于IRI组和SFN+IRI组之间。2免疫组织化学法及免疫印迹（westernbolt）法检测：Akt、P-Akt、GSK-3β、P-GSK-3β、Bcl-2、Bax蛋白经免疫组织化学法检测的阳性表达主要位于各组供心心肌细胞的胞浆，呈棕黄色反应。1）Akt蛋白在各组中的表达虽有

8、轻微差异但P＞0.05，无统计学意义；P-Akt蛋白在SFN+IRI组的表达明显增加，与IRI组比较P＜0.05，有统计学意义；LY294002干预后