pei-peg-angiopep介导胸苷激酶靶向脑胶质瘤的实验研究

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1、学校代码：10200学校名称：东北师范大学分类号：巡研宄生学号：2012102118东妗畤忿夫營硕士学位论文PEI-PEG-Angiopep介导胸苷激脚ffi向脑胶质瘤的实睡研究AnexperimentalresearchaboutPEI-PEG-Angiopepmediatedthymidinekinasetargettogliomafortreatment作者：张勋指导教师：朱_教授•级学科：生物学二级学科：细胞生物学研究方向：胂癯学位类型：学术碩士东北师范大学学位评定委员会2015年5月独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师指导下独立进行

2、研宄工作所取得的成果。据我所知，除了特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果。对本人的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中作了明确的说明。本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：弓汰炎力曰期:猶“、十学位论文使用授权书本学位论文作者完全了解东北师范大学有关保留、使用学位论文的规定，即：东北师范大学有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权东北师范大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编本学位论文。(保密的学位论

3、文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：指导教师签名：曰期：感“4日期：&屮学位论文作者毕业后去向:工作单位；—电话:通讯地址：邮编:摘要基因治疗是治疗神经胶质瘤有效方法之一，胸苷激酶（thymidinekinase，TK）能够将无毒的前体药物更昔洛韦（ganciclovir，GCV）转变为细胞毒性物质更昔洛韦三磷酸（ganciclovirtriphosphate，GCV-TP），从而干扰DNA合成，使DNA复制终止细胞死亡。除此之外，GCV/TK还呈现旁观者效应。目前主要以病毒载体和干细胞介导TK表达，但病毒载体存在安全隐患，干细胞有其应用的局限性。聚乙

4、烯亚胺（polyethyleneimine，PEI）为非病毒类基因载体，具有优越的基因传递性能，常被用于基因转染，通过在PEI表面引入靶向基团可以实现主动靶向。本研究首先通过慢病毒介导TK表达，发现GCV/TK能够有效抑制HEK293T和胶质瘤SHG44的增殖，呈现出GCV浓度依赖和时间依赖效应。比较细胞增殖抑制率发现，表达TK的HEK293T和SHG44细胞，GCV的IC50分别为53.0μM，和15.49μM，表明胶质瘤细胞对GCV/TK具有更好的敏感性。进一步，将表达TK与未表达TK的SHG44细胞按1:1的比例混合培养，GCV处理后，未表达TK的SH

5、G44也死亡，表明GCV/TK在胶质瘤中有旁观者效应。进一步，体内荷瘤研究表明，GCV/TK能抑制肿瘤的增殖。为了避免病毒载体可能出现的安全隐患，引用了非病毒类基因载体PEI-PEG。结果表明，PEI-PEG能介导TK在U87MG中表达，有效表达的TK使GCV转化为GCV-TP，产生细胞毒性，抑制细胞增殖。为了能够更好的实现脑靶向，在PEI-PEG上键合脑靶向基团Angiopep、引入胶质细胞特异启动子GFAP，这些策略都有效介导TK的表达使GCV转化为GCV-TP，从而抑制肿瘤细胞增殖，这些工作表明PEI-PEG不仅具有良好的基因传输性能，还可以实现组织特

6、异性表达。目前，我们建立了U87MG-Luc脑胶质原位瘤模型，为更好的研究PEI-PEG-Angiopep介导TK实现组织特异性表达，使GCV转化为GCV-TP抑制胶质原位瘤提供了平台。关键词：神经胶质瘤；胸苷激酶；PEI-PEG-Angiopep；胶质原位瘤IAbstractGenetherapyisoneoftheeffectivemethodsforgliomatreatment.Thymidinekinase(TK)cantransformganciclovirintocytotoxicsubstancesGanciclovirTriphosphat

7、e（GCV-TP）.Then,GCV-TKcandisturbDNAreplicationresultingincelldeath.Inaddition,GCV/TKtreatmentalsoshowedabystandereffect.Sofar,majorTKdeliveryvehiclesarevirusandstemcells.However,virussystemhassecurityissuesandstemcellhaslimitationsinapplication.Bothdefectslimitedtheapplicationofgene

8、therapyforglioma.Polyethyl