胸苷激酶系统血管靶向抗肝癌效应的机制

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1、胸苷激酶系统血管靶向抗肝癌效应的机制李宝金，张超，周玉梅，郝颖，刘晓平，区庆嘉【关键词】肝肿瘤；KDR启动子；基因治疗;重组腺病毒；胸苷激酶系统；HepG2细胞；裸鼠,Balb/c【Abstract】AIM:ToexplorethetherapeuticefficacyandmechanismofHSVtkfortargetingangiogenesisagainsthepatocellularcarcinoma.METHODS:ByusingpAdeasysystem,rebinantadenoviruscontainingkinasedomainre

2、ceptor(KDR)orcytomegalovirus(CMV)promotercontrolledHSVtkgene(AdKDRtkandAdCMVtk)anumbilicalvenousendothelialcells(HUVEC)andKDRunexpressedHepG2.Folloinistrationofganciclovir(GCV),thesurvivalrateofgeransfectedHUVECandHepG2ethod.HepatocarcinomasiceinistrationofrebinantadenovirusorAdi

3、ntratumorallyedinallrats.GCVg/(kg・d)ipinthefolloorinallthetreatedanimalsmunohistochemicalmethodsandtumorburdeninistration.RESULTS:ThepAdeasysystemproducedahightiteroftherebinantadenovirus〔(1×1013)pfu/L〕.OI)0upto50mg/L,thesurvivalrateofAdKDRtktransfectedHUVECandHepG2decreasedfrom(

4、90.7±4.5)%and(91.8±4.3)%to(28.9±5.7)%and(75.4±2.9)%,respectively(P0.01),100%to(17.6±2.5)%and(23.2±5.7)%,respectively(P>0.05).paredoredianMVDicrovessels/mm2)ingroupI,II,IIIandIV,respectively;andthereoterHSVtkgenemayeffectuallyrestrainthegroorviatargetingangiogenesisofhepatocell

5、ularcarcinomaentofGCV.【Keys;KDRpromoter;genetherapy;herpesSimplexvirusthymidinekinase;HepG2cells;Mice,Balb/c【摘要】目的：探讨KDR为启动子的HSVtk重组腺病毒对肿瘤血管内皮细胞的特异性杀伤效能及机制.方法：采用pAdeasy系统，构建受KDR启动子或巨细胞病毒(CMV)启动子调控并可表达HSVtk基因的重组腺病毒，体外分别感染人脐静脉血管内皮细胞系（HUVEC）和肝癌细胞系HepG2，并以MTT法检测其细胞增殖情况.人肝癌皮下移植瘤裸鼠随机分成

6、更昔洛韦组(I)，空载体病毒组(II)，重组腺病毒CMVtk组(III)及重组腺病毒AdKDRtk组(IV).各治疗组瘤内分别注入重组腺病毒液及空载体病毒液.重组腺病毒治疗组在病毒给予24h后分别ipGCV，连续10d.对照组，ipGCV.观察瘤体大小及免疫组化法定量测定肿瘤微血管密度.结果：病毒滴度均为1×1013pfu/L.感染复数（MOI）为100的条件下，GCV浓度由0增至50mg/L时感染含AdKDRtk的HUVEC细胞和HepG2细胞存活率由(90.7±4.5)%和(91.8±4.3)%分别下降至(28.9±5.7)%和(75.4±2.9)%

7、（P0.01），而感染含AdCMVtk的HUVEC细胞和HepG2细胞存活率分别下降至(17.6±2.5)%和(23.2±5.7)%（P>0.05）.体内试验中，与对照组比较，Ⅲ,IV组经治疗后肿瘤的生长均受到了明显的抑制，其抑瘤率分别为(14.7±3.2)%和(23.6±5.6)%（P0.05）.组织内的平均血管密度（MVD），Ⅰ组为37.4±8.6，Ⅱ组为30.6±7.8，Ⅲ组为27.6±7.1，IV组为10.7±4.1.其中，Ⅲ组与Ⅱ组(P0.05)，IV组与Ⅱ组(P0.01)，IV组与Ⅲ组(P0.01)之间比较均有统计学差异.结论：KDR启

8、动子介导的HSVtk具有特异性杀伤肿瘤血管内皮细胞的作用.【关键词】肝肿瘤；KD