腺病毒介导kdr启动子的胸苷激酶基因对血管内皮细胞的靶向杀伤作用论文

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1、腺病毒介导KDR启动子的胸苷激酶基因对血管内皮细胞的靶向杀伤作用论文朱欠元，周玉梅，李宝金，毛慕华，彭才圣，郭剑【关键词】内皮,血管；KDR启动子；单纯疱疹病毒属；胸苷激酶；腺病毒科SelectivekillingofvascularendothelialcellsbasedonadenovirusmediatedherpessimplexvirusthymidinekinasegenetransfectionunderthedrivingofKDRpromoter【Abstract】AIM:Toinvest

2、igatethetargetkillingeffectofadenovirusmediatedherpessimplexvirusthymidinekinasegene(HSVtk)transfectionunderthedrivingofKDRpromoteronthevascularendothelialcellsinvitro.METHODS：ByusingAdEasysystem,rebinantadenovirusplasmidcontainingKDRorcytomegalovirus(CMV)p

3、romotercontrolledHSVtkgene(AdKDRtkandAdCMVtk)plificationin293cells,thevirusanumbilicalvenousendothelialcells(HUVEC)andKDRunexpressedE2.Folloinistrationofganciclovir(GCV),thesurvivalrateofgeransfectedHUVECandE2ethod.RESULTS：TheAdEasySystemproducedahightitero

4、ftherebinantadenovirus(1×1013pfu/L).Underinfectionindexof100,0upto50mg/L,thesurvivalratesofAdKDRtktransfectedHUVECandE2decreasedfrom(89.4±4.6)%and(91.5±4.4)%to(22.9±4.7)%and(71.4±2.9)%atproperorderrespectively(P0.01),(89.9±6.2)%and(90.8±5.7)%to(12.8±2.6)%an

5、d(18.8±6.1)%,respectively(P0.05).CONCLUSION：AdenovirusmediatedHSVtktransfectionunderthedrivingofKDRpromotercouldyieldthespecifickillingeffectonvascularendothelialcellsentofGCV.【Key,vascular;KDRpromoter;simplexvirus;thymidinekinase;adenoviridac【摘要】目的：体外实验评估腺

6、病毒介导KDR启动子胸苷激酶系统(HSVtk)杀伤血管内皮细胞的作用.方法：采用新型AdEasy系统，构建受KDR启动子和巨细胞病毒(CMV)启动子调控并可表达HSVtk基因的AdKDRtk和AdCMVtk，在293细胞中包装、扩增后.freelg/L时感染含AdKDRtk的HUVEC细胞和E2细胞存活率从(89.4±4.6)%和(91.5±4.4)%分别下降至(22.9±4.7)%和(71.4±2.9)%（P0.01），而感染AdCMVtk的HUVEC细胞和E2细胞存活率从(89.9±6.2)%和(90.8

7、±5.7)%分别下降至(12.8±2.6)%和(18.8±6.1)%（P0.05）.结论：腺病毒介导KDR启动子胸苷激酶系统具有特异性杀伤血管内皮细胞作用.【关键词】内皮，血管；KDR启动子；单纯疱疹病毒属；胸苷激酶；腺病毒科0引言肿瘤生长有赖于血液营养和氧气供给，阻断肿瘤组织内血管生成和血管化是一个很有发展前景的灭瘤或阻止肿瘤转移有效的途径［1-2］.随着分子生物学及基因工程技术的发展，基因治疗给恶性肿瘤的治疗提供了新方法.研究表明胸苷激酶系统(HSVtk/GCV)能有效杀伤血管内皮细胞［3］，血管内皮细胞

8、生长因子(VEGF)是目前所发现血管生成相关因子中最重要的血管生长因子，其生物效应是通过其特异性受体（KDR）介导的.我们研究以腺病毒介导的KDR启动子单纯疱疹病毒胸苷激酶系统结合丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)对血管内皮细胞的杀伤作用，为进一步开展靶向鼻咽癌血管的自杀基因疗法奠定实验基础.1材料和方法1.1材料带有HSVtk基因的由CMV启动子驱动的重组腺病毒(AdCMVtk)和带有HS