neu-p11通过抑制氧化应激改善脂肪细胞胰岛素抵抗

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1、■：．：ｓ藝：：漏ｉ．ｒ７７〉’分类！号Ｑ７密级公开￣￣￣￣ＵＤＣ前＾编号１＾＂Ｖ：＠或＃义拿硕：ｉｒ学位论文（学术学位）Ｎｅｕ－Ｐｌｌ通过抑制敦化应激改善脂肪细胞肤每素抵抗研究生姓名：蒋文艳指导教师、职称；余美华副教授学科专化生物学研究方向；糖尿病发病与防治分子机制所在学院：药学与生物科学学院二０—五年五月？Ｔ。：ｊ＇－？＇’苦，Ｌ．＇－■ｉ一种一，＇．＾：繫讓论文题目Ｎｅｕ－Ｐ。通过抑制氧化座激改善：脂肪細胞肤岛素抵抗论文作者签名：私

2、指导教师签名：合巧论文评阅人１；尹卫东，教授，博导，南华大学评阅人２：乔新惠，教授，硕导，南华大学答辩委员会主席：贺修胜，，教授，博导南华大学委员１；王宗保，教授，硕导，南华大学委员２：唐小卿，教授，硕导，南华大学委员３；田英，教授，硕导，南华大学委员４；曹运长，副教授，硕导，南华大学答辩日期：２０１５年５月１９日南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加［＾｜标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已

3、经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的料。与工同志材我同作的对研的贡献均已在论共本究所作中确。全。文作了明的说明人意识明的法果由人承本完到本声律结本担’主皆：若者签名作年月曰ｙ娘作大南华学学权位论文版权使用授书（／）±本学位论文是本人在南华大学攻读硕学期博硕位间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研不得究内容它单位的。、：Ｗ其名义发表本人同意南华学关保留使用学位论文的规定，大有即学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅借和阅；学校可Ｗ公布学位论

4、文的全部或部分内容，可Ｗ采巧复印、印或其它手段保留学位论文；学校可根据国缩或湖南省有关部口规定送交学位论文。意学将论加入《中国优家同校文秀博硕±学论文全文》，《位数据库并按中国优秀博硕±学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。技论《同意授权中国科学信息术研所将本学位文收录到中究。国学论文全》，通过位文数据库网络向社公众提供信息服对于涉密的学并会务论。位文，解密后适用该授权：義作者签名导师签备等＾年／攻月日年少月咬日本课题资助项目国家自然科学基金(81200590)教育部博士点基金(20124324120

5、005)湖南省科技厅课题（No.2012FJ42)VNeu-P11通过抑制氧化应激改善脂肪细胞胰岛素抵抗摘要研究背景褪黑素(melatonin,Mel)是脑松果腺合成和分泌的一种吲哚类神经内分泌活性物质，具有调节昼夜节律、改善睡眠等功能。Neu-P11则是一种新型褪黑素非选择性受体激动剂，我们前期的研究表明Neu-P11可调节高糖高脂高胆固醇诱导的肥胖大鼠糖脂代谢并改善其胰岛素抵抗(insulinresistance,IR)状态，体外细胞试验也证实Neu-P11能够抑制甘油三酯聚积改善3T3-L1脂肪细胞IR。有研究报道，细胞内活性氧(reactiv

6、eoxygenspecies,ROS)水平过高造成的氧化应激和线粒体功能障碍是导致胰岛素抵抗的主要因素。基于Neu-P11、氧化应激以及IR之间的联系，本课题在前期实验的基础上提出假想：Neu-P11是否通过抑制氧化应激而改善高糖高胰岛素(highglucoseandhighinsulin,HGI)诱导的3T3-L1脂肪细胞IR。方法(1)3T3-L1脂肪细胞的诱导及分化：经典“鸡尾酒”法(0.5mmol/LIBMX，1µmol/LDEX，10µg/mlINS)诱导前脂肪细胞分化为成熟3T3-L1脂肪细胞，油红O染色鉴定脂肪细胞形态及3T3-L1前脂

7、肪细胞的分化程度。(2)IR模型的制备：高糖(25mmol/L)高胰岛素(1µmol/LINS)孵育脂肪细胞24h，葡萄糖氧化酶法检测糖消耗量验证胰岛素抵抗细胞模型构建是否成功。(3)荧光探针法、罗丹明123及葡萄糖氧化酶法VI分别检测Neu-P11或Mel干预前后各组脂肪细胞中ROS含量、线粒体膜电位(mitochondrialtransmembranepotential,MMP)变化及培养基内葡萄糖含量。(4)WesternBlot检测细胞c-jun氨基末端激酶(JunN-terminalkinase,JNK)、核转录蛋白p65(Nuclearf

8、actorkappaBp65,NF-κBp65)、蛋白激酶B(ProteinkinaseB,Akt)的表达变