microrna-21参与上皮性卵巢癌的化疗耐药及其作用机制

《microrna-21参与上皮性卵巢癌的化疗耐药及其作用机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：R737.31密级：不保密UDC：618学校代码：11065硕士学位论文MicroRNA-21参与上皮性卵巢癌的化疗耐药及其作用机制于晓敏指导教师姚勤教授学科专业名称妇产科学论文答辩日期2015年5月31日MicroRNA-21参与上皮性卵巢癌的化疗耐药及其作用机制中文摘要第一部分上皮性卵巢癌患者血清microRNA-21的水平及其临床意义研究目的：检测上皮性卵巢癌化疗耐药及化疗敏感患者血清中microRNA-21的表达，并探讨其评估上皮性卵巢癌化疗耐药及预后的可行性。方法：采用探针型real-timePCR技术检测和比较20例上皮性卵巢癌患者和10例正常人血清标

2、本中microRNA-21的表达，并分析血清microRNA-21水平与上皮性卵巢癌患者化疗耐药及其临床病理特征的相关性。结果：正常人、上皮性卵巢癌化疗敏感和化疗耐药患者血清中microRNA-21的相对表达量分别为0.573±0.318、2.606±1.057、26.766±26.710，上皮性卵巢癌化疗敏感和化疗耐药患者血清中miR-21的相对表达量均显著高于正常人血清中miR-21的相对表达量(P<0.05)，而上皮性卵巢癌化疗耐药患者血清中miR-21表达显著高于上皮性卵巢癌化疗敏感患者，差异有统计学意义(P<0.05)。化疗耐药患者血清miR-21表达水平与其手

3、术-病理分期无明显差异（P>0.05），化疗耐药患者血清miR-21的表达水平与是否发生淋巴结转移无明显相关性（P>0.05）。结论：上皮性卵巢癌化疗耐药患者血清microRNA-21水平显著升高，提示其可能是上皮性卵巢癌化疗耐药的潜在肿瘤标志之一。关键词：上皮性卵巢癌；miR-21；化疗耐药；Taqman探针；实时荧光定量PCR第二部分MicroRNA-21通过负性调节PTEN参与上皮性卵巢癌的顺铂耐药目的:通过检测卵巢癌细胞株SKOV3/DDP与SKOV3中miR-21的差异性表达，探讨miR-21在与上皮性卵巢癌的顺铂耐药关系。并进一步检测PTEN在mRNA水平和蛋

4、白水平的表达，探讨miRNA-21促进上皮性卵巢癌顺铂耐药的可能作用机制。方法：（1）MTT法检测SKOV3/DDP相对于其敏感细胞株对顺铂的耐药性和耐药指数；（2）采用real-timePCR技术检测miRNA-21和PTENmRNA在SKOV3及SKOV3/DDP中的差异性表达；（3）westernblot检测PTEN蛋白在SKOV3及SKOV3/DDP细胞中的表达；（4）SKOV3细胞株和SKOV3/DDP细胞株分别用脂质体2000转染miR-21mimics及inhibitors。并分别设置阴性对照组。转染后，MTT法检测SKOV3及SKOV3/DDP细胞的耐药性

5、。realtimePCR测定SKOV3及SKOV3/DDP中miR-21和PTENmRNA的表达量。westernblot的方法检测PTEN蛋白在卵巢癌敏感及耐药细胞株中的表达。结果：（1）顺铂对SKOV3及SKOV3/DDP细胞的IC50值分别为5.351μmol/L和22.488μmol/L，两者之间差异有统计学意义（P＜0.05），耐药指数为4.2倍。（2）从SKOV3及SKOV3/DDP中提取总RNA，real-timePCR的检测证实miR-21在SKOV3/DDP中的相对表达量显著高于其在SKOV3细胞中的表达。而PTENmRNA在SKOV3及SKOV3/DD

6、P细胞中的表达无明显差异（P>0.05）（3）westernblot检测发现PTEN蛋白在SKOV3细胞中表达量高于其在SKOV3/DDP细胞的表达（4）real-timePCR检测证实SKOV3+mimics细胞中miRNA-21的相对表达量较阴性对照组升高了344倍，而SKOV3/DDP+inhibitor细胞中miRNA-21相对表达量约为阴性对照组的0.109倍，差异均有统计学意义(P<0.05)。（5）real-timePCR检测证实SKOV3+mimics细胞中PTENmRNA的相对表达量较阴性对照组明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。而SKOV3/D

7、DP+inhibitor细胞中PTENmRNA的相对表达量与阴性对照组PTENmRNA的相对表达量无明显差异（P>0.05）。PTENmRNA在SKOV3+nc组和SKOV3/DDP+nc组的相对表达量亦无明显差异（P>0.05）。（7）转染后，顺铂对SKOV3+nc和SKOV3+mimics细胞的IC50值分别为5.205μmol/L和25.763μmol/L，SKOV3+mimics细胞较阴性对照组耐药倍数升高约4.9倍。顺铂对SKOV3/DDP+nc和SKOV3/DDP+inhibitor细胞的IC50值分别为21.91