lin28b调控人乳腺癌干细胞干性特征和糖代谢的机制研究

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1、也京碱如皆學償，中＠＃３刮《化硕±研究生学位论文羹北京协和医学院研究生院北京棘和隆学院硕±学位论文学校代码：１００２３学号：Ｓ２０００５０５３１２硕±学位论文ＬＩＮ２８Ｂ调控人乳腺癌干细胞干性特征和糖代谢的机制研究所院；中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院姓名：白丽鹏导师：罗云萍教授学科专业；免疫学研究方向：肿瘤免疫完成日期：２０１５年５月北京协和隆学院硕±学位论文目录一第部分：ＬＩＮ２８Ｂ维持乳腺癌干细胞的干性持征的机制研究１ｍｍ１Ａｂｓｔｒａ

2、ｃｔ３英施略表５一第章前Ｓ６第二胃材料与方法９一第节主要试剂９第二节实验方法１０第Ｈ章实验结果１６第四章小结２１第五章讨论２２第二部分２４；ＬＩＮ２８Ｂ调控乳腺痛干细胞糖代谢的机制研究摘要２４Ａｂｓｔｒａｃｔ２６英文缩略表２８一第章前言巧第二章材料与方法３１一第节仪器设备３１北京协和色学院硕±学位论文第二节细胞系、菌株和载体３２第呈节主要试剂及相关溶液配制３３第四节实验方法３５第Ｓ章实验结果４１一－ＭＢ－２３第节人乳腺癌ＭＤＡ１脚瘤干细胞的糖代谢

3、状态４１第二节ＬＩＮ２犯对乳腺癌细胞糖代谢的调控作用４４第兰节糖酵解对乳腺癌干细胞的干性特征的影响４８第四章小结５０第五章讨论５１总结５３综述６０个人简历７３敬ｉｉ７４独创性声明１５北巧协和竖学院硕±学位论文一部分第；ＬＩＮ２８Ｂ维持郭腺癌干细胞的干性特征的化制研究摘要研究目的：肿瘤干细胞是肿瘤组织中数量极少具有干细胞特性的细胞，既表现出干细胞的特性又有肿瘤细胞的特点，是肿瘤耐药、复发和转移的根源。有研巧Ｗ证明ｈ１ＣＤ４４ｉｇｈＷ表型的肺癌细胞比ＣＤ４４表型的肺癌细胞有更强的成球能力和致瘤

4、性，ｈｉｈｇ接种３００个ＣＤ４４细胞于ＮＯＤ／ＳＣＩＤ（非肥胖糖尿病／重症联合免疫缺陷）小鼠就４｜°？５＞＜＞＜〇可，３１〇４４细胞或５１１＾＾形成肿瘤而接种个０〇个未分离的混合细胞都不能一形成巧瘤。ＬＩＮ２８是种首先在线虫Ｃｇ／ｅ沪Ｉ加Ｓ中发现的ＲＮＡ结合蛋白，在其发育过程中起重要作用；在哺乳动物中ＬＩＮ２８具有结构和功能高度同源的两种同系物Ｐ］ＬＩＮ２８Ａ和ＬＩＮ２犯。已有研究表明ＬＩＮ２８在多种肿瘤中高表达，与肿瘤的发生、－口＾一￣转移密切相关。ｍｉｃｒｏＲＮＡ是类长度为２１２５个核巧酸的非编妈ＲＮＡ，通过’Ｗ－与範基因ｍＲＮＡ的３ＵＴ

5、民结合对其进行转录后调控。有研巧发现ＬＩＮ２８通过阻止Ｌｅ－ｔ７的加工成熟，影响範基因的表达从而对调节细胞代谢和干性发挥重要作用７［气已有的研究主要是集中在Ｌ８－ＩＮ２通过抑制Ｌｅｔ７的加工成熟发挥调控作用，不８ｍ－ＷＬＩＮ２犯过ＬＩＮ２也能调控其他ｍｉＲＮＡｓ如ｉＲ１５〇。本研充的主要目的是探究对乳腺癌干细胞干性特征的调控并通过ｍｉＲＮＡ测序发现其他受ＬＩＮ２８Ｂ调控的一ｍ－ｉＲＮＡｓ并进步研巧ｍｉＲＮＡ对ＭＣＦ７肿瘤干细胞的作用。－ＭＤＡ－２３ＭＢ１细胞和低转移性研究方法：首先检测恶性程度高的Ｈ阴性乳腺癌－ＭＣＦ７孰腺癌细胞干性相关基因ＳＯＸ２

6、、ＯＣＴ４、ＮＡＮＯＧ和ＬＩＮ２８Ｂ的ｍＲＮＡ和－蛋白表达２犯。然后在ＭＣＦ７，确定ＬＩＮ在恶性程度不同的乳腺癌细胞中的表法水平－ＣＭＶ６－ＩＮ２８ＢＬ细胞转染ＰＬ质粒瞬时过表达ＩＮ２犯，通过ＲＮＡ测序找出差异表达一的ｍＭＣＦ－７细胞建立ＬＩＮ２８Ｂ细ｉＲＮＡｓ，并进步通过病毒感染方法在稳定过表泣胞系，检测干性相关基因ｍＲＮＡ和蛋白的表达、利用流式细胞仪检测ｈｉｇｈ°ｗｉＣＤ４４ＣＤ２４细胞比例和通过成球培养比较体外成球能力－７细胞。最后在ＭＣＦｈｉ°ｗｍｉｇｈＣＤ２４转染该差异表达的ｉＲＮＡｍｉｍｉｃ，检测ＣＤ４４细胞比例和比较体外成球能力。

7、研究结果：ＤＡ－－１．ＬＩＮ２８Ｂ在恶性程度高的ＭＭＢ２３１细胞表达显著増高。－２．ＬＩＮ２犯能明显上调ＭＣＦ７细胞ＳＯＸ２、ＯＣＴ４和ＮＡＮＯＧ的表达。ｈ１Ｗ心－３犯能上调ＭＣＦ－７细ＣＤ４４ＣＤ２４ＣＦ７细胞．ＬＩＮ２胞中细胞比例和促进Ｍ的体外成球能力。－－－－－７ｍ－、ｍｉ４９３４．ＭＣＦ细胞过表达ＬＩＮ２犯后ｉＲ９２ｂ５ｐ表达上调，ｍｉＲ４５２１Ｒ１ｐ－４－５达下调和ｍｉ艮９２ａｐ表。ｈｉｇｈｉ°ｗ－ｍ－－ｍ５ｉｍｉ．ＭＣＦ７细胞转染ｉＲ９２ｂ５ｐ