当归多糖调控人白血病干细胞衰老的机制研究

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1、当归多糖调控人白血病干细胞衰老的机制研究　　[摘要]目的：探讨当归多糖（Angelicasinensispolysaccharide，ASP）体外诱导人白血病干细胞衰老的相关机制。方法：免疫磁性分选法分离人急性髓系白血病患者骨髓白血病干细胞（leukemiastemcells，LSCs）;不同质量浓度的当归多糖（20～80mg?L^-1）体外诱导LSCs48h，CCK-8检测LSCs增殖能力;甲基纤维素半固体培养法检测LSCs形成白血病细胞集落（CFU-LC）能力;透射电子显微镜分析细胞超微结构变化;β-半乳糖苷

2、酶（SA-β-Gal）染色检测细胞衰老;qRT-PCR分析LSCs衰老相关基因p53，p21，p16和Rb表达;Westernblotting检测P16，Rb，CDK4和CyclinE蛋白表达。结果：分选后LSCs纯度达（91.15±2.41）%，形态良好。经不同浓度当归多糖作用后，LSCs呈现明显的的浓度依赖性增殖抑制。40mg?L^-1当归多糖作用LSCs48h，其SA-β-Gal染色阳性细胞率明显升高，CFU-LC形成能力下降;超微结构显示细胞线粒体肿胀，溶酶体数量增多，异染色质边集;衰老相关基因p53，p

3、21，p16和Rb表达上调;衰老相关蛋白P16和Rb表达上调，CDK4和CyclinE表达下调。结论：当归多糖在体外能诱导人LSCs衰老，推测其可能机制与当归多糖调控P16-Rb信号通路有关。　　[关键词]当归多糖;白血病干细胞;衰老;调控机制　　[收稿日期]2014-10-13　　[基金项目]国家自然科学基金项目（81173398）　　[通信作者]*王亚平，教授，博士生导师，Tel：（023）68485968，E-mail：ypwangcq@aliyun.com　　Biologicalmechanismsofhuman-derivedleukemiast

4、emcellssenescence　　regulatedbyAngelicasinensispolysaccharide　　JIADao-yong，LIUJun，LICheng-peng，LIJing，ZHANGMeng-si，ZHANGYan-yan，JINGPeng-wei，　　XUChun-yan，WANGYa-ping*　　（InstituteofStemCellandTissueEngineering，DepartmentofHistologyandEmbryology，　　ChongqingMedicalUniversity，Chongqing

5、400016，China）　　[Abatract]Objective：ToexplorethebiologicalmechanismsunderlyingAngelicasindsispolysaccharide（ASP）-inducedagingofhuman-derivedleukemiastemcells（LSCs）invitro.Method：Acutemyelogenousleukemiastemcellswereisolatedbymagneticactivatedcellsorting（MACS）.TheabilityofLSCprolife

6、rationtreatedbyvariousconcentrationofASP（20-80mg?L^-1）invitrofor48hoursweretestedusingcellcountingKit-8（CCK8），colonyformingwereevaluatedbymethylcelluloseCFUassay.TheultrastructurechangesofAMLCD34+CD38-cellswereanalyzedbytransmissionelectronmicroscopy.Theaging

7、cellsweredetectedwithsenescence-β-galactosidaseKitstaining.Expressionofaging-relatedp53，p21，p16，RbmRNAandP16，Rb，CDK4andCyclinEproteinweredetectedbyquantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction（qRT-PCR）andWesternblotting，respectively.Result：ThepurityoftheCD34+CD38-cellsis

8、（91.15±2.41）%aftersortedandshowed