人脐带间充质干细胞重编程为神经干细胞的调控机制研究

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1、？■－－．—？１－－？？－京诚與晴聲供中＠聲３钟《巧＞硕±研究生学位论文龜＾ｐ．：北京协和医学院研究生院学校代码；１００２３学号：Ｓ２０１２０１８０１０硕±学位论文人腺带间充质干细胞重编程为神鐘干细胞的调控机制研究ＮｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｒｅｒｏｒａｍｍｅｄｆｒｏｍｈｕｍａｎｐｇｕｍｂｉｌｉｃａｌｃｏｒｄＭｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｆ：ｅｍｃｅｌｌｓ所院：医学生物学研究所姓名：目姗姗

2、指导教师；李鸿钩研究员导师小姐：周艳博±学科专业：生物化学与分子生物学研究方向：干细胞与基因治疗完成日期：２０１５年５月目录摘要１Ａｂｓｔｒａｃｔ２引ｓ４一第部分人腺带间充质干细胞的分离培养及鉴定８一、实验材料与方法８二、实验结果与分析１３Ｈ、讨论１６第二部分携带Ｓ０Ｘ２基因和下调Ｍｂｄ３基因重组慢病毒的构建及鉴定化一、实验材料和方法１９二、实验结果与分析３０吉Ｍ论３７３９第兰部分人腕带间充质干细胞向神经干

3、细胞的诱导分化及鉴定一＞实验材料及方法４０二、实验结果与分析４３Ｈ、讨论４９小５２Ｓ５３５７附录致谢６３研究生简历６５中闡医学科学院北京协和医学院硕±研究生学位论文摘要一神经退行性疾病是类Ｗ神经元退行性病变或神经元细胞调ｔ，导致个体行为异常乃至死亡的疾病，使得纳胞替代性治。由于中枢神经系统的自我修复能力有限一疗成为重建受损神经系统的组织结构，恢复神经系统功能的种有效策略。诱导型神经干细胞ｉｎｄｕｃｅｄＮｅｕｒａｌｓｔ

4、ｅｍｃｄｌｓｉＮＳＣｓ）具（，有自我更新和分化为神经元和胶质细胞的能力，能够释放神经营养分子和生长因子，对分化后的神经元细胞具有营养一保护作用，是神经退行性疾病细胞替代治疗中的种理想细胞资源。自２００６年鼠胚胎纤维母细胞被诱导成诱导型多能干细胞（ｉｎｄｕｃｅｄｈｉｒｉｏｔｅｎｔｐｐｓｔｅｍｃｄｌｓ，ｉＰＳＣｓ）Ｗ来，成体细胞的重编程已经成为再生医学领域中有潜能和有价一一值的工具，。利用成体干细胞间充质干细胞经诱导分化为神经干细胞移植进行一神经退行性疾病治疗，已成为种新的治

5、疗思路。在成体细胞重编程为神经干细胞ｒｅ－的过程中，Ｓ０Ｘ２（ｓｅｘｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｉｏｎＹｂｏｘ２）具有重要作用，能够启动成体细ｇｈｌ－Ｇ－ｉｄｏｍａｉｎｉ胞向神经干细胞的分化。Ｍｂ犯（ｍｅｔｙＣｐｂｉｎｄｎｇｐｒｏｔｅｎ３）基因对早期的细胞发育，维持胚胎干细胞的多能性和多能细胞的发生发展起着重要的作用。在，我们分离培养了人航带间充质干细胞（ｈｕｍａｎｂｉｌｉｃａｌｃｏｄＭｅ址ｌ本研究中ｕｍｒｓｅｎｙｍａｔ－ｓｅｍｃｅｌｌｓｈＵＣＭＳＣｓ），通过慢病毒介

6、导的化ＲＮＡ下调Ｍｂｄ３基因表达的同时导入，Ｓ０Ｘ２基－因，在化学诱导因子作用下，将ｈＵＣＭＳＣｓ转分化为诱导型神经干细胞，并对其生物活性进行鉴定。本研究中分离得到的人腕带间充质干细胞通过流式细胞术检测其表面特异性－抗原标记，，，表达ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｄ不表达ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＨＬＡＤＲ与文献一报道的致，具有多向分化的能力，能够分化为成脂细胞和成骨细胞。－－－－ＭＳＣｓ后Ｓ０Ｘ２能够成功转录和表达ＰＬＶＥＧＦＰＳＯＸ２２Ａ重组慢病毒感染ｈＵＣ，ｂｄ３－－２－Ｓ

7、ＣｐＬＶＭｓｈＲＮＡＥＧＦＰＡ重组慢病毒感染ｈＵＣＭｓ后，能下调Ｍｂｄ３的转录和表达。诱导分化结果表明，Ｓ０Ｘ２单纯诱导组和ｓｉＭｂ出巧０Ｘ２诱导组可检测到神经＋ｉＭｂｄ３ＳＯＸ２干细胞特异基因的转录和特异性抗原的表达，其中ｓ诱导组的成功率明显比Ｓ０Ｘ２单纯诱导组高。将诱导型神经干细胞（ｉＮＳＣｓ）向神经细胞方向分化，一结果显示，ｉＮＳＣｓ能够分化为神经元细胞和胶质神经细胞，具有定的分化能力。ｂｄ３本研究发现，下调细胞中Ｍ蛋白的表达水平，导入转录因子Ｓ０Ｘ２，ｈＵＣ－ＭＳＣｓ

8、能够分化为诱导型神经干细胞，并具有向神经细胞，包括星形胶质细胞和神经元细胞分化的能力，在此过程中Ｓ０Ｘ２转录因子开启旅带间充质干细胞向神经干细胞转分化的过程，３的表达可提高分化效率和成功率下调Ｍｂｄ。此项研究目一的在于探索－ＭＳＣｓ向神经干细胞分化的途径条有效的体外诱导ｈＵＣ，为细胞替代性治疗神经退行性疾病提供科学依据和思路。：厮带间充质干细胞ＳＯＸ２，Ｍｂｄ３关键词，诱导型神经干细胞，１中国医学科学院北京协和医学院硕±硏巧生学位论文