人脐带间充质干细胞治疗肝脏疾病的实验研究

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1、北京协和医学院中国医学科学院博士研究生学位论文博士学位论文学校代码：学号：人脐带间充质干细胞治疗肝脏疾病的实验研究Therapeuticeffectofhumanumbilicalcordmesenchymalstemcellsonliverdiseases所院：血液学研究所血液病医院姓名：王汉裕指导教师：庞天翔教授导师小组：刘拥军副教授李庆华副教授马丽副教授学科专业：病理学与病理生理学研究方向：干细胞生物学完成日期：二零一二年五月10023B2009385北京协和医学院中国医学科学院博士研究生学位论文目录第一部分脐带间充质干细胞基本生物学特性中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一．英文摘要⋯⋯⋯

2、⋯～⋯⋯一一4．6．8前言⋯⋯⋯⋯⋯～⋯⋯⋯．材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．结果⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯一讨{《≥⋯⋯⋯～⋯⋯一⋯⋯．．参考文献第二部分间充质干细胞对肝纤维化小鼠治疗的研究中文摘要．英文摘要⋯．前言10213639．．．．．．．．．-．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．。⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．．47材料和方法⋯．结讨果⋯⋯一一论⋯⋯⋯一参考文献52．．．．．．．．57．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．-．．．．．．．．．．。．．．．．．．．．．67第三部分间充质干细胞对爆发性急性肝衰竭小鼠治疗的研究中文摘要⋯⋯～⋯～英文摘要

3、⋯⋯⋯一前言材料和方法⋯⋯⋯⋯一结讨果论参考文献．84⋯⋯．．86．．．．．．．．．．．．．．．．88293⋯9810l北京协和医学院中国医学科学院博士研究生学位论文综述1．肝纤维化基质改变机制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯～⋯．1072．间充质干细胞在免疫系统中起到安全信号的作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．120附录一主要实验仪器和试剂附录二主要溶液配制附录三常见英文缩写附录四在学期间发表论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一致谢⋯一．学位论文独创性声明学位论文版权使用授权书139141145㈣㈣723北京协和医学院中国医学科学院博士研究生学位论文第一部分脐带间充质干细胞基本生物学特性摘要背景：地塞米松是糖皮

4、质激素类药物，常被用来促进间充质干细胞的成骨、成脂、成软骨分化。最近，地塞米松也应用于间充质干细胞的体外扩增培养，尤其是骨髓来源的间充质干细胞。而且，亦有研究显示地塞米松能减少细胞的凋亡。因此，需要系统地研究地塞米松对间充质干细胞基本细胞生物学的影响。另外，虽然很多实验数据都证明间充质干细胞对某些疾病的有效性，但是间充质干细胞的生物安全性也需要明确。所以，本实验也初步探讨了脐带来源的间充质干细胞的生物安全性。目的：由于具有独特的器官修复功能和免疫调节功能，MSC广泛应用于各种疾病的治疗研究。但是MSC在体外不容易扩增，常常需要添加地塞米松来促进细胞的增殖。因此，需要系统地研究和比较地塞米松对

5、MSC的基本细胞生物学特性的影响。另外，也需要初步探讨MSC的安全性。方法：从人脐带中获取MSC，并对MSC做出鉴定，包括流式细胞仪检测细胞表型和分化。然后经过不同浓度的地塞米松培养2周后，收获MSC细胞，进行流式细胞仪检测细胞表型、促增殖实验、免疫调节实验、检测分泌因子等等。在生物安全性方面，我们检测了MSC的TP53基因序列、端粒酶反转录酶表达测定、细胞核型分析、长期毒性实验和致瘤性实验。．结果：我们的实验结果显示不同浓度的地塞米松对MSC的作用有差异性。在促增殖和影响凋亡上，高低两种浓度的地塞米松对MSC的作用刚好出现相反的效果。然而，不管浓度高低，地塞米松都能损坏MSC的免疫调节能力

6、。高浓度的地塞米松还明显抑制了MSC分泌HGF。而低浓度的地塞米松则促进了VEGF的分泌。生物细胞安全性方面的实验没发现MSC有毒性及致瘤性。结论：低剂量的地塞米松能促进MSC的体外扩增，并增强MSC的抗凋亡能力。但是由于地塞米松能损坏MSC的免疫调节能力，因此，要利用MSC的免疫调节功能来治疗疾病，则不合适在MSC的培养过程中添加地塞米松。低浓度的地塞米松能4北京协和医学院中国医学科学院博士研究生学位论文促进MSC高分泌VEGF，这有利于提高MSC治疗促进血管新生类疾病。而且，我们的数据也证明了MSC使用的安全性。关键词：地塞米松；间充质干细胞；安全性；评价北京协和医学院中国医学科学院博士

7、研究生学位论文PartOneMesenchymalstemcellbasiccytobiologicalpropertiesAbstractBackground：Dexamethasone(Dex)isapotentsyntheticmclliberoftheglucocorticoidclassofsteroiddrugs．Frequentl弘Dexhasbeenused幻enhanceosteogenio