人脐带间充质干细胞重编程为诱导多能干细胞的基础研究

《人脐带间充质干细胞重编程为诱导多能干细胞的基础研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、人脐带间充质干细胞重编程为诱导多能干细胞的基础研究ThebasicstudiesofreprogrammingHumanUmbilicalCordMesenchymalStemCellsintotheInducedPluripotentStemCells姓名：刘思征导师：马廉教授专业名称：儿科学研究方向：小儿血液系统疾病及干细胞研究入学时间：2010年9月答辩时间：2013年5月申请学位：医学硕士2013年5月汕头大学医学院硕士毕业论文学位论文原创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰

2、写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。学位论文使用授权声明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密的论文，按照保密的有关规定和程序处理。本论文属于：保密（），在年解密后适用本授权声明。不保密（）。（请在以上括号内打“√”）作者签名：导师签名：日期：年月日日期：年月II汕

3、头大学医学院硕士毕业论文III汕头大学医学院硕士毕业论文目录中文摘要………………………………………………………………………………………Ⅰ英文摘要………………………………………………………………………………………Ⅱ符号表（缩略词）……………………………………………………………………………Ⅳ前言……………………………………………………………………………………………1技术路线…………………………………………………………………………………………4材料和方法………………………………………………………………………………………5材料……………………………………………………………………………………

4、……5方法…………………………………………………………………………………………7结果……………………………………………………………………………………………20讨论……………………………………………………………………………………………30参考文献………………………………………………………………………………………33附录1：主要混合液及培养基…………………………………………………………………37附录2：慢病毒滴度计算公式…………………………………………………………………38-ΔΔCt附录3：2法计算公式………………………………………………………………………38专家述评………………………

5、………………………………………………………………39致谢……………………………………………………………………………………………47个人简历………………………………………………………………………………………48I汕头大学医学院硕士毕业论文I汕头大学医学院硕士毕业论文中文摘要【背景与目的】诱导多能干细胞（inducedpluripotentstemcells,iPS细胞）是一种具有类似胚胎干细胞(Embryonicstemcell，ES细胞)特性和功能的多能干细胞。iPS细胞来源于自体细胞，具有低免疫原性，且不受伦理问题的制约，因此，其被越来越广泛的应用于细胞替代治疗、疾病机理及药物筛

6、选研究。尽管如此，寻找更合适的ips细胞来源及安全有效的诱导方案是急需解决的问题。我们的前期研究表明，人脐带间充质干细胞（HUMSCs）自身表达iPS所需部分相关基因且具有一定的多能性。因此，HUMSCs有可能作为产生iPS细胞的理想来源。本项目旨在探讨HUMSCs来源iPS细胞（HUMSC-iPS）的生物学特性及其诱导效率，并建立一套安全而高效的HUMSC-iPS培养途径，从而为进一步探讨HUMSC-iPS的形成机制和分化能力奠定基础。【材料与方法】（1）采用差异贴壁法分离、培养、扩增出人脐带间充质干细胞；（2）质粒转化、测序并扩增；（3）质粒共转染293T细胞，包装出重组慢病毒

7、液；（4）倒置显微镜测定冻存前后病毒液滴度；（5）流式细胞术检测病毒感染力；（6）RT-PCR、荧光定量PCR检测感染后HUMSCs内基因表达情况；（7）组织贴壁法原代培养胎鼠成纤维细胞（MEF）及制作MEF饲养层；（8）分别携带转录因子（Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc）的重组慢病毒载体同时感染HUMSCs，嘌呤霉素筛选后，消化铺入饲养层，观察克隆的形成。8【结果】（1）质粒测序、验证正确；（2）制备的新鲜病毒液滴度达5×10u/ml，冻存后降6为5×10u