人脐带间充质干细胞免疫调节机制的研究

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1、也，京碱如皆爭院中固聲５钟３獻博±研究生学位论文麵北京协和医学院研究生院学校代码：１００２３学号２〇ｎｏｉ４〇：Ｂｎ博±学位论文人昕带间充质干细胞免疫调节机制的研究Ｔｈｅ田ｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｃｏｒｄＭｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅ皿ｃｅｌｌｓｉｎｉｍｉｍｍｏ田ｏｄｕｌａｔｉｏ打所院：血液学研究所血液病医院姓名；李雪指导教师：韩忠朝教授导师小组：中法实验室姐学科专业：内科学研究方向：干细胞基础及应用研究—完成日期：二〇五年四月目录一ＩＬ－ｉ、ＴＮＦ－ａＩ－

2、第部分：人巧带间充质干细胞与外周血单个核细胞的相互作用；ｐ、ＦＮＹ与细胞死亡中１；ｔ摘要英：摘要３前胃６材料与方法８结２２：！識３８结论４１参考文献４２第二部分：人麻带间充质干细胞可诱导ＣＤ４＋１型调节性Ｔ细胞发挥其免疫调节作用４７英文摘要４９前Ｓ５１材料与方法５２龍５４？论讨５６微５８５９参考文献综述间充质干细胞与免疫细胞的相互作用６３附录一主要仪器材料及试剂９８附录二主要溶液的配置１０１附录Ｈ常见英文缩写和代码１０３附录四巧学期间发表文章

3、１０４致谢１０５北京协和医学院中国医学科学院博±研巧生学位论文一第部分；人腺带间充质干细胞与外周血单个核细胞的相互作用；ＩＬ－ＴＮＦ－ａ－ｌｐ、、ＩＦＮＹ与细施死亡摘要背景：间充质干细胞因其具有长期体外扩增、多项分化潜能和免疫调节作用，成为用于细胞基础的组织修复和自身免疫性疾病治疗极有前景的种子细胞。挤带间充质，与骨髓间充质干细胞相比干细胞分离自巧带，其涉及伦理问题巧少。并且与分离一自其他成体组织的间充质干细胞相比，相对更原始，是种介于胚胎干细胞和成体一干细胞间的种细胞。厮带间充质干细胞易于分离、增殖能力强、不会诱发崎胎瘤

4、一并具有较强的免疫抑制能力，因此，麻带间充质干细胞成为种更有应用前景的间一。充质干细胞另方面，近期研究报道，间充质干细胞的免疫调节作用并不是固有的，其免疫调节作用的发挥与所处的微环境密切相关。目前人们对微环境对ＭＳＣｓ免疫调节作用发挥的研究相对较少。－目的－：我们前期研巧发现，单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）产生Ｌｉ参与ｈＵＣＭＳＣｓ的免ｐ疫调节作用。因此，在本研巧中，我们致力于研巧在ＭＳＣｓ病理生理和治疗条件下与其密切相关的ＰＢＭＣｓ对ＭＳＣｓ免疫调节作用的影响及其机制。１方法：（）分离骄带间充质干细胞，并行流式细胞术进行免疫表型鉴定。（２）在诱导

5、一培养条件下，经茜素红染色和油红０染色，步鉴定间充质干细胞Ｈ系分化能力进。（３）建立ＰＢＭＣＣＭ刺激ｈＵＣ－ＭＳＣｓ最佳培养条件，并利用最佳培养条件，比较ｈ－ＭＳＣｓ与ＢＭ－ＭＳＣｓ与ＰＢＭＣＵＣｓＣＭ作用后表达细胞因子的差异。同时通过检测不同培养上清中相关细胞因子含量－Ｍ，寻找ＰＢＭＣｓ对ｈＵＣＳＣｓ作用的重要细胞因子－１３ＴＮＦ－。（４）应用重组细胞因子化、ａＷ及相关信号通路抑制剂（ＬＹ２９４０００２、｜Ｋ－－ＪＮｉｎｈ化ｔｏｒｌｌ、ＢＡＹ１１７０８２ＳＣ５１４Ｕ〇ｎ６、ＳＢ２ｉ、、０３５８０）作用细胞，通过检－－测忙６与ＭＣＰ１的表达比

6、较正－－－Ｉｐ与ＴＮＦａ对ｈＵＣＭＳＣｓ表达细胞因子的差异。５ＴＮＦ－ａＩＦＮ－ＴＲＡＩＬＦａ（）应用重组细胞因子、丫、Ｗ及ｓＬ，分别通过ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ？Ｌｕｍ－ｉｎｅｓｃｅｎｔＣｅｌＶｉｉｌｉｔＡｎｎｅｘｉｎ双ｌａｂｙＡｓｓ巧Ｗ及ＰＩ和Ｆ打Ｃ染观察不同细胞因子对－ｈＵＣＭＳＣｓ死亡的－－作用，并同时检测上清中正６与ＭＣＰ１的表达，研巧细胞死亡ａｎ－ｃａｓａｓｅｚＶ－ｆｍｋＶＭ与细胞因子分泌的关系。在部分实验中，２０，加入ｐｐ抑制剂ＡＤ（＾）ＲＩＰ１－ｅｃｒｏｓｔａｔ－ＭＳＣ或抑制剂ｎｉｎ１Ｎ５０ｘＭ，研巧Ｃｓ（，｜）不同细胞因子诱

7、导ｈＵ细胞死亡的机制。（６）应用调亡蛋白抑制蛋白小分子括抗剂ＧＤＣ－０１５２处理经ＴＮＦ－ａ刺激Ｃ－ＭＳＣｓ的ｈＵ，分别行共聚焦染色、分别提取细胞核与细胞浆进行免疫印迹，同时－－收集处理细胞上清行正６ＭＣＰ１检测－ａ促进ｈＵＣ－ＭＳＣ与，探讨ＴＮＦｓ分泌细胞因子的机制。结果：（１）人骄带间充质干细胞表达ＣＤ４４、ＣＤ７３、ＣＤ９０和ＣＤ１０５，３４不表达ＣＤ、ＣＤ１９、ＣＤ３１、ＣＤ４５及ＨＬＡ－Ｄ民－Ｗ（ＨＬＡＩＩ类分子）。在体外诱导培养条件下，具有Ｈ系分化的能力，符合国际细胞治疗协